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1、匙羹藤提取物体外抑菌活性的观察作者：扈玉华,路建荣,朱习会,张明明,王军霞【摘要】目的观察匙羹藤提取物(Gymnemasylvestreextractant,GE)的体外抑菌活性。方法采用琼脂稀释的实验方法,分别测定匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的MIC分别为0.625、1.25、1.25、2.5mg/mL。结论匙羹藤提取物对多种细菌具有抑菌作用。【关键词】匙羹藤提取物；体外抑菌活性；最低抑菌浓度 Keywords：Gymnemasylvestreex
2、tractant；invitroantibacteralactivity；minimuminhibitoryconcentration匙羹藤(Gymnemasylvestre)系萝摩科植物,主要分布在我国广东、广西、福建、台湾和云南等省区。全株可药用,民间用于治疗风湿性关节痛、糖尿病、疥痈肿毒、毒蛇咬伤、枪弹伤及杀虱等[1]。近年来,匙羹藤引起了国内外学者的高度重视,对其化学成分和药理作用进行了大量的研究,但仅限于降血糖、抗龋齿和抑制甜味反应等作用。本研究主要对匙羹藤提取物的抑菌效果进行了实验观察,现将试验结果报道如下。7 1材料 1.1仪器微量多点接种仪：北京医
3、科大学昆仑药物发展研究所生产。微量移液器：德国Eppendorf公司。 1.2培养基Mulele-Hrint琼脂：法国生物梅里埃公司生产,简称M-H琼脂。 1.3药材购广西产匙羹藤叶。取匙羹藤干燥叶1.0kg,粉碎后,加40%乙醇水溶液加热提取3次[2],过滤,合并滤液,减压回收乙醇,母液于水浴上蒸干,得深棕色提取物122g。然后加适量的水溶解,用水饱和的正丁醇萃取3次,合并正丁醇层并减压蒸干,用正己烷脱脂,脱脂产物用甲醇提取,浓缩甲醇分别用70%的乙醇水溶液4L回流提取4次,合并提取液,浓缩至干,得匙羹藤提取物25.1g。7 1.4菌种及菌悬液的制备标准菌株：金黄
4、色葡萄球菌(25923)、大肠杆菌(25922)、绿脓杆菌(27853)、变形杆菌(29383)均由河北医科大学微生物实验室提供。分别取其标准菌株,采用16h新鲜斜面培养物,用生理盐水稀释成含菌量为105～106cfu/mL的菌悬液[3]。 2方法 2.1纸片琼脂扩散法抑菌试验[4] 2.1.1菌片的制备[5] 将定性滤纸制成6mm直径的圆片,经高压蒸汽灭菌后,干燥保存备用。取处理好的滤纸片放入无菌平皿中,用10μL移液器把含匙羹藤提取物浓度为50%的提取液滴加在无菌滤纸片上,阴性对照片滴加10μL的生理盐水,置无菌室晾干,阳性对照选用已制好的标准的药敏头孢塞肟纸
5、片。 2.1.2步骤7 首先在M-H琼脂平板表面均匀的涂抹试验菌悬液,置室温干燥5min,在每个平板表面周边距贴3个试验和1个阴性对照纸片,中心贴1个阳性对照纸片。然后将贴好纸片的平板放在37℃温箱中培养24h,观察结果。用数显游标卡尺测量数据。 2.1.3判定标准 抑菌环直径大于7mm者判为有抑菌作用,抑菌环直径小于或等于7mm为无抑菌作用,阴性对照应无抑菌环产生,否则试验无效,抑菌环越大说明抑菌效果越好。 2.2最低抑菌浓度的测定 2.2.1步骤 用蒸馏水将匙羹藤提取物配制成5%的提取液,排列无菌试管(6支编序),在1－6支试管中分别加入10mL的M-H
6、液体培养基,于第1支试管中加入10mL5%匙羹藤提取液,混匀,然后取出的10mL5%匙羹藤提取液加入第2支试管中,混匀,依次类推,第5支试管中取出10mL弃掉,而第6支试管不加药物作为阴性对照。最后在每个试管中加入0.1mL试验菌悬液,混匀,阳性对照取西药抗生素头孢三代头孢米诺钠,用同样的方法依次稀释相对应的浓度。然后在37℃温箱中培养24h,观察结果。 2.2.2判定标准7 含药物的试管中以及阳性对照的试管中液体清亮判断为该药物有抑菌作用,阴性对照的试管中液体浑浊判断为该药物无抑菌作用,倍比稀释后有抑菌作用的最低药物浓度判为该中药提取物的最低抑菌浓度(MIC)。
7、3结果 (见表1、表2)表1匙羹藤提取物对不同试验菌抑菌环直径的影响(略)注：表中对照为阳性对照 表1显示,匙羹藤提取物浓度为50mg/mL,在M-H琼脂平板上对金黄色葡萄球菌、变形杆菌及大肠杆菌标准菌株的抑菌环直径均大于7mm,显示出其抑菌作用,但对绿脓杆菌抑菌效果较差,抑菌圈直径小于或等于7mm。所有阴性对照无抑菌环产生。表2匙羹藤提取物的抑菌作用（略）注：“+”表示有菌生长,“-”表示无菌生长 表2结果表明,匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌最为敏感,而对大肠杆菌和变形杆菌的抑菌效果也可。匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大
