rad001对胃癌mkn-45细胞生长影响的实验研究

《rad001对胃癌mkn-45细胞生长影响的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、RAD001对胃癌MKN-45细胞生长影响的实验研究作者：蔡红星，朱正秋，朱祖安【摘要】目的探讨RAD001对胃癌细胞株MKN-45细胞生长的影响及可能作用机制。方法体外培养MKN-45细胞，给予RAD001干预后通过细胞计数检测MKN-45细胞数目，流式细胞术检测细胞周期分布，Western-blot检测核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、S6蛋白表达及磷酸化情况。结果RAD001作用于MKN-45细胞24h：RAD001对MKN-45细胞的生长产生抑制作用，抑制作用具有时间依赖性;MKN-45细

2、胞细胞周期发生改变，停滞在G0-G1期细胞比例增加;MKN-45细胞的4E-BP1、p70S6K、S6无明显变化，phosphate-p70S6K、phosphate-S6表达缺失，phosphate4E-BP1表达下降。结论RAD001是通过抑制mTOR下游通路阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节细胞周期以发挥抑制MKN-45细胞生长的作用。【关键词】胃癌;MKN-45细胞;RAD001;细胞生长;抑制作用;机制　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofRAD001ongastriccarcinomac

3、elllineMKN-45andtoexplorethepossiblemechanism.MethodsGastriccarcinomaMKN-45celllinewere9culturedinRPMI1640with10%fetalcalfserumandtreatedbyRAD001(20nmol/L);afterwards,thecellcoulter,flowcytometry,western-blotarraywereusedtodetectthegrowth,cellcycleandproteinexpressionofthetumorcells.Resul

4、tsFollowingRAD001treatment,theMKN-45cellswereinhibitedinatime-dependencemanner.TherewerechangesinthecycleoftheMKN-45cells,withanincreaseinthecellpercentageofG0-G1phasestagnation.Meanwhile,therewerenomarkedchangesintheexpressionsofeukaryotictranslationinitiationfactorseIF-4E(eIF-4E)andphos

5、phate-4E-BP1,ribosomalprotein40Skinase,andtherewaslossintheexpressionofphosphate-p70S6Kandphosphate-S6,andtheexpressionofphosphate4E-BP1wasdown-regulated.ConclusionRAD001caninhibitthegrowthofgastriccarcinomacelllineMKN-45bytheadjustmentofcellcycleviainhibitionofthedownstreampathwayofmTORa

6、ndtheconsequentblockageofthephosphorylationandproteintranslationofp70S6Kand4E-BP1.　　Keywords:gastriccarcinoma;MKN-45cell;RAD001;cellgrowth;inhibitoryeffect;mechanism9　　细胞生长和细胞增殖是相互不同但又相关的两个过程,它们在器官的生长、组织的形成及肿瘤的生长中起着重要的作用。mTOR(mammaliantargetofrapamycin)是雷帕霉素(rapamycin)的靶分子，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，

7、在感受营养信号、调节细胞生长与增殖中起着关键性的作用[1]。mTOR信号通路调控异常与肿瘤发生密切相关，是肿瘤治疗的靶点[2-3]。RAD001为雷帕霉素的衍生物，为mTOR的抑制剂。本研究对RAD001对胃癌细胞株MKN-45细胞生长的影响及其机制进行了探讨。　　1材料和方法　　1.1材料和仪器RAD001、胃癌细胞株MKN-45细胞为奥地利大学VolkerWachek博士馈赠。RAD001用二甲基亚砜(DMSO)配成1mmol/L贮备液，实验时用RPMI1640稀释为20nmol/L。RPMI1640、小牛血清购自美国GI