不同连接比例叶酸偶联壳聚糖的制备

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1、不同连接比例叶酸偶联壳聚糖的制备作者：赵颖，杨琰，卢实，张红菱【摘要】目的叶酸与壳聚糖偶联，并制备不同连接比例的叶酸偶联壳聚糖。方法通过叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应，制得叶酸偶联壳聚糖;采用红外光谱法验证偶联是否成功，紫外分光光度法测定每个壳聚糖上连接叶酸的量。结果叶酸偶联壳聚糖红外光谱图表明，叶酸与壳聚糖成功偶联，并制备了每个壳聚糖上连接叶酸的量大致为3个、10个、20个、30个的叶酸偶联壳聚糖。结论叶酸与壳聚糖成功偶联，并成功制备了不同连接比例的叶酸偶联壳聚糖。【关键词】叶酸;壳聚糖;偶联;基因治疗　　ABSTRACT:ObjectiveTocouplefolatewithchit

2、osanandpreparefolatecoupledchitosanbydifferentconnectionratio.MethodsThefolatecoupledchitosanwaspreparedbythereactionoftheactivatedfolateesterwiththeaminegrouponthechitosan.Thenthefolatecoupledchitosanwasverifiedbyinfraredspectroscopy.ThenumberoffolatesineachofthechitosanswasmeasuredbyUVspectr

3、ophotometry.ResultsInfraredspectroscopyshowedthatthefolatecoupledchitosanwaspreparedsuccessfully,andthenumberoffolatesineach9chitosanwasapproximately3,10,20and30.ConclusionCouplingoffolatewithchitosanwassuccessful,andfolatecoupledchitosanbydifferentconnectionratiowassuccessfullyprepared.　　KEYWO

4、RDS:folate;chitosan;coupling;genetherapy　　基因治疗是一种将外源基因导入目的细胞并有效表达从而达到治病目的的治疗方法。基因治疗载体一般分为病毒型载体和非病毒型载体。非病毒型基因载体壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒，虽然具有无毒性、生物可降解性、良好的生物相容性以及其本身带正电荷易与DNA、RNA结合等优点，但其基因转染活性较低[12]。　　叶酸叶酸受体靶向是近年来倍受青睐的一种新型抗肿瘤机制。通过配体受体作用可将基因、药物靶向导入高表达叶酸受体的病理组织和细胞中，而正常细胞不受影响，从而大大增加了基因治疗的安全性和有效性。因此，我们选择叶

5、酸(folicacid,FA)修饰壳聚糖，并在后期研究中将其应用于基因转染技术中，以提高基因转染的靶向性和转染活性。　　1材料与方法9　　1.1主要仪器及试剂AL204电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司);DF101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂);UV240IPC紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司);NEXUS670傅立叶红外光谱仪(美国尼高力仪器公司);冷冻干燥机(EZ550Q，美国)。壳聚糖(济南海得贝海洋生物工程有限公司，MW：50ku，脱乙酰度>90%);叶酸(上海伯奥生物科技有限公司);无水二甲基亚砜(DMSO，上海捷瑞生物工程有限公司);1

6、(3二甲氨基丙基)3乙基碳化二亚胺[EDC，吉尔生化(上海)有限公司];其余试剂均为国产分析纯。　　1.2方法　　1.2.1壳聚糖的纯化壳聚糖用10mL/L醋酸溶解，滴加氨水使其沉淀，沉淀用去离子水洗涤至中性，冷冻干燥得到纯化的壳聚糖[3]。　　1.2.2壳聚糖脱乙酰度的测定准确称取0.25g干燥至恒重的壳聚糖，置于250mL三角瓶中，加入20mL标准0.1mol/L盐酸溶液，室温磁力搅拌1h至全溶，加入10mL蒸馏水稀释，滴加3滴10g/LIKI指示剂。在磁力搅拌下，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至亮紫色颗粒状沉淀出现(充分振荡不溶解)即为滴定终点[45]。重复测定3

7、次取平均值，按以下公式计算脱乙酰度：9　　NH2%=(C1V1-C2V2)×0.016G×100　　式中C1：盐酸标准溶液的浓度(mol/L);C2：氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);V1：加入的盐酸标准溶液的体积(mL);V2：滴定消耗的氢氧化钠标准溶液体积(mL);G：样品质量(g);0.016：与1mL、1mol/L盐酸溶液相当的氨基量(g)。　　脱乙酰度(D.D.)/%=NH2%9.94%×100　　1.2.3叶酸偶联壳