tgfβ1、tgfβr1、smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系

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1、TGFβ1、TGFβR1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系作者：夏立平，刘晓力，陈国平，郑武平，何冬雷，高炳玉【摘要】　　目的：探讨TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系，为乳腺癌发病和治疗机制提供理论和实验依据。方法：提取30例乳腺癌临床标本（经液氮、研磨等处理）和MCF7、T47D、SKBR3三种乳腺癌细胞（取指数增长期细胞）总RNA，反转录cDNA第一链，克隆TGFβR1、Smad4基因片段，测定质粒浓度，制备标准样品，并作出

2、标准曲线，探针法荧光定量PCR（FQPCR）检测TGFβR1和Smad4基因mRNA表达。结果：FQPCR检测发现恶性程度高的SKBR3细胞，其TGFβR1和Smad4的基因拷贝数明显低于恶性程度低的MCF7细胞（P均＜0.01），T47细胞两种基因拷贝数介于两者之间。结论：随着乳腺癌细胞病理类型恶性程度增加，TGFβR1和Smad4mRNA表达逐步下降，表明TGFβ1和Smad4可能具有类似乳腺癌抑癌基因的作用。【关键词】转化生长因子β1;转化生长因子β1受体;Smad4;乳腺癌　　［ABSTRACT］Ob

3、jective:Toinvestigatetheexpressionof17TGFβ1,TGFβR1andAmad4proteinsandtherelationshiptotheinitiation,progression,metaptosisandprognosisofbreastcancer.Methods:Thesamplesof30casesand3celllines(MCF7,T47D,SKBR3)ofbreastcancerwereselected,andthetotalmRNAwasextracted.

4、Reversetranscription,andTGFβR1andSmad4genescloningwerecarriedout.Thentheconcentrationofplasmidwasmeasured,standardcurvewasmade,andtheexpressionofTGFβR1andSmad4mRNAswereassayedbyFQPCRmachine.Results:ThegenecopiesofTGFβR1andSmad4inSKBR3cellswerelowerthanthatinMC

5、F7cells(P＜0.01)andthegenecopiesinT47wasmiddle.Conclusions:OurstudiesbyFQPCRshowthatthelowerTGFβR1andSmad4mRNAsexpression,theworsebiologycharacteristicofbreastcancer,whichindicateTGFβR1andSmad4actpossiblyastheroleofantioncogeneinbreastcancer.　　［KEYWORDS］TGFβ1;

6、TGFβR1;Smad4;Breastcancer17　　乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，全世界每年约有120万妇女患乳腺癌。目前，乳腺癌病因尚不十分清楚，发病机理非常复杂，涉及多个因素的作用。多数研究认为，乳腺癌的发生是因为原癌基因的激活和抑癌基因的功能丧失，其发展是一个多因素多阶段的过程，往往涉及多个基因的改变［1,2］。TGFβ/Smads信号传导通路及其与肿瘤关系多见于胰腺癌、妇科肿瘤等［3,4］，而在乳腺癌中TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者的表达及其相互关系如何，它们对乳腺癌发生、发展有何意义，目前还

7、不完全清楚。本实验拟采用荧光定量PCR(fluorescentquantitationpolymerasechainreaction，FQPCR)、免疫组织化学/免疫细胞化学、WesternBlotting等技术，检测乳腺癌患者和乳腺癌细胞株中的TGFβ1、TGFβR1和Smad4在mRNA水平和蛋白水平表达，进一步深入三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系，为探讨TGFβ信号转导过程提供新的思路，同时为乳腺癌的Smad4基因导入治疗，以及尝试应用iRNA技术，提供理论和实验依据　　1材料

8、与方法　　1.1材料　　1.1.1标本和细胞　　本组乳腺癌临床标本共30例，全部为海南医学院附属医院2005年1月～2008年12月门诊或住院患者，其中外科手术切除标本25例，病理活检标本5例。患者年龄24～60岁，中位年龄43岁；按照病理学类型分为非浸润性癌4例、早期浸润性癌6及浸润性癌