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时间:2018-08-01
《人肝癌细胞总rna电转染树突状细胞对t细胞的激活效应》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞对T细胞的激活效应作者:单铁英苏安英唐军民【摘要】目的:采用Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA电转染人外周血树突状细胞(DendriticCell,DC),观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法:通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用细胞因子体外培养诱导其成为DC。Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入DC内;通过混合淋巴细胞实验,获取DC激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞的增殖率。结果:电转染方法可将人肝癌细胞总RNA导入DC;电转染前后DC分子表达无显著差异。转染了人肝癌细
2、胞总RNA的DC可特异的激活T细胞且增殖率明显增强(P<0.05)。结论:电转染为人肝癌细胞总RNA导入DC提供技术上的可行性;转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异激活T细胞。【关键词】树突细胞核糖核酸转染肝肿瘤【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheactivationeffectinhumanperipheralbloodDendriticCell(DC)electransfectingtotalRNAofhepatocarcinomacellsextractedbyTrizolinvitro.Methods:Monocytesobta
3、inedfrom9humanperipheralbloodbydensityguadientcentrifugationwereinducedintoDCinthepresenceofcytokinesinvitro.ThetotalRNAofhepatocarcinomacellswasextractedbyTrizolandwaseletransfectedintomonocytederivedDC.EffectiveTcellsweregotbymixedlymphologyreaction,inwhichDCactivatedTcellsgradually,thent
4、heproliferationrateofeffectiveTcellscouldbeexaminedbytheMTTmethod.Results:ElectransfectioncouldsuccessfullymakeRNAintoDC.TherewasnosignificantdifferenceinDCmoleculeexpressionaftertheelectransfection.DCwithtotalRNAofhepatocarcinomacellscouldactivatespecificallyTcellsandProliferationratewassig
5、nificanthigh.Conclusion:ElectransfectionprovidesatechnicalpossibilitytomakehepatocarcinomatotalRNAintoDC.DCwithtotalRNAofhepatocarcinomacellscanactivatespecificallyTcells.【KEYWORDS】DendriticCells,RNA,Transfection,LiverNeoplasms肝癌的治疗手段有多种,但对于进展期肝癌,仍然无法彻底解决肿瘤复发与转移的问题。近年来文献报道肿瘤细胞RNA转染树突状细胞(Dend
6、ritic9Cell,DC)可以诱导强烈的抗肿瘤免疫,但在用RNA电转染DC的方法尚无报道,我们研究了肝癌细胞株Bel7402总RNA电转染的DC对T细胞的体外激活效应,以探索其治疗肝癌的可行性。1材料与方法1.1一般资料新鲜人外周血,购自北京市血库。人肝癌细胞株Bel7402,由北京大学基础医学院免疫学系惠赠。淋巴细胞分离液(Ficoll,1.077g/mL),购自上海试剂二厂。鼠抗人CD14、鼠抗人MHCⅡ、鼠抗人CD86、鼠抗人CD83、鼠抗人S100,即用型二步法生物素检测试剂盒(PV9000)、FITC标记的第II抗体工作液购自北京中山生物技术有限公司。TRI
7、ZOL试剂盒、绿色荧光蛋白(GFP)mRNA,购自Invitrogen公司。1.2方法1.2.1单核细胞、未成熟树突状细胞(ImmatureDendriticCell,imDC)的获得及培养取正常人新鲜外周血200mL,以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,在37℃和5%CO2饱和湿度条件下培养2h,取贴壁细胞即单核细胞,加入RPMI1640液、10%胎牛血清(FCS)和细胞因子rhGMCSF1000U/mL;rhIL4500U/mL继续培养。第7d收获的细胞为imDC。91.2.2肝
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