shirley clift modified-tg 小鼠基因组dna提取方法及其在gene -trap中的应用

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1、ShirleyCliftmodified-TG小鼠基因组DNA提取方法及其在Gene-Trap中的应用【摘要】目的：介绍一种简单、快速、高效同时从数十、甚至上百个小鼠尾巴中提取基因组DNA的方法。方法ShirleyCliftmodified-TG小鼠Gene-TrapDNA提取法。结果使用该法从小鼠尾巴中获取的基因组DNA的数量、纯度完全适用各种实验，如在C3H/HCJ-Mgrn1md转基因小鼠杂交C57BL/6小鼠Mahogunin基因变异传代培殖实验中，应用鼠尾抽提的DNA进行Gene-trap。类推该法到小鼠其它组织如肝、肾、肌肉和心脏，也同样得

2、到了高质量的基因组DNA。结论该技术可以连续、高效、快速、批量从小鼠组织中提取基因组DNA，为国内利用小鼠进行基因遗传疾病的研究提供了基础方法。【关键词】小鼠基因组DNADNA提取基因型鉴定　　【Abstract】ObjectiveTointroduceaverysimple,fast,availablemethodforextractinggenomicDNAfromseveral,eventensofmicetailssimultaneously.MethodsUsingmiceGene-TrapDNAisolationprocedurecreat

3、edbyShirleyCliftmodified-TG.ResultsThegenomicDNAquantityandqualityextractedfrommicetailsbythismethodcompletelymadetheexperimentendsmeet.Insuchcase,thedataofGene-traptestderivedfrommicetailsgenomicDNAbythismethodshowedahighqualitygenomicDNAin9thegenemutationgenerationproducedbyC3

4、H/HCJ-Mgrn1mdtransgenicmicematingwithnormalC57BL/6mice,andsowereextrapolationtoothertissuessuchaslivers,kidneys,musclesandhearts.ConclusionSuchsimple,fast,incessant,validprocedureforextractinghighqualitygenomicDNAfrommanymicetissuessimultaneouslywillprovidepractitionerswithanadd

5、itionaltooltostudythegeneticdisordersofmiceinourcountry.　　【KeyWords】MiceGenomicDNADNAextractionGenotyping9　　从小鼠尾巴中提取DNA并对其基因型进行确定，在实验室的研究中应用得极为广泛，如基因克隆、基因的多态性分析、信号传导、基因突变、数量性状位点等，其中转基因小鼠培养和维持不同基因类型疾病杂交后代的基因型鉴定以及利用微卫星做图锁定基因染色体上的位点，成为当前的热点。建立一种简单、快速、高效并同时从数十甚至上百个小鼠尾巴中提取基因组DNA的方法是进

6、行这方面研究的第一步。当前，国内对于提取血液基因组DNA的方法报道很多［１～４］，但从动物组织中［５～８］尤其是从小鼠组织中快速提取DNA鲜有报道。汪永庆等［５］报道从大仓鼠组织中提取基因组DNA的改进方法是从鼠组织中提取DNA的较好方法之一。但该法每个标本都要用到电动匀浆器，并不适合大批量样本提取，因为单是为避免各样本之间交叉污染，清洗电动匀浆器转头就是一项耗时费力的工作。所以，要连续数月在同一天从数十上百个小鼠尾巴中提取基因组DNA并应用到实验中，报道的方法显然不能满足大量样本的提取。作者2004-2005年度在美国康奈尔大学生物医学系Dr.Gun

7、n实验室，使用了ShirleyCliftmodified-TG小鼠Gene-TrapDNA提取方法，该法不但简单快速高效，而且在转基因小鼠培养和基因QTL作图等方面获得了较好的验证。现报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料剪取小鼠尾巴0.4～0.8cm，放入1.5mlEppendorf管中，当天用于基因组DNA提取或者放入-20℃冰箱保存数天也可，如需长期贮存，则应放入-80℃冰箱。　　1.2试剂DNA提取缓冲液［0.1MNaCl,50mMTris-HCl(pH8.0),2.5mMEDTA,0.5%SDS］；蛋白酶K（100μg/ml）,使用前加入；

8、8M醋酸钾；氯仿；100%乙醇；75%乙醇；TE或灭菌ddH2O。　　1.3操作步骤（1）根据