shirley clift modified

《shirley clift modified》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ShirleyCliftmodified【关键词】小鼠基因组DNADNA提取基因型鉴定　　【Abstract】ObjectiveTointroduceaverysimple,fast,availablemethodforextractinggenomicDNAfromseveral,eventensofmicetailssimultaneously.MethodsUsingmiceGene-TrapDNAisolationprocedurecreatedbyShirleyCliftmodified-TG.ResultsThegenomicDNAqua

2、ntityandqualityextractedfrommicetailsbythismethodpletelymadetheexperimentendsmeet.Insuchcase,thedataofGene-traptestderivedfrommicetailsgenomicDNAbythismethodshoicDNAinthegenemutationgenerationproducedbyC3H/HCJ-Mgrn1mdtransgenicmicematingalC57BL/6mice,andsousclesandhearts.Conclu

3、sionSuchsimple,fast,incessant,validprocedureforextractinghighqualitygenomicDNAfrommanymicetissuessimultaneouslyiceinourcountry.　　【KeyiceGenomicDNADNAextractionGenotyping　　从小鼠尾巴中提取DNA并对其基因型进行确定，在实验室的研究中应用得极为广泛，如基因克隆、基因的多态性分析、信号传导、基因突变、数量性状位点等，其中转基因小鼠培养和维持不同基因类型疾病杂交后代的基因型鉴定以及利用微卫

4、星做图锁定基因染色体上的位点，成为当前的热点。建立一种简单、快速、高效并同时从数十甚至上百个小鼠尾巴中提取基因组DNA的方法是进行这方面研究的第一步。当前，国内对于提取血液基因组DNA的方法报道很多［１～４］，但从动物组织中［５～８］尤其是从小鼠组织中快速提取DNA鲜有报道。汪永庆等［５］报道从大仓鼠组织中提取基因组DNA的改进方法是从鼠组织中提取DNA的较好方法之一。但该法每个标本都要用到电动匀浆器，并不适合大批量样本提取，因为单是为避免各样本之间交叉污染，清洗电动匀浆器转头就是一项耗时费力的工作。所以，要连续数月在同一天从数十上百个小鼠尾巴中提取

5、基因组DNA并应用到实验中，报道的方法显然不能满足大量样本的提取。2004-2005年度在美国康奈尔大学生物医学系Dr.Gunn实验室，使用了ShirleyCliftmodified-TG小鼠Gene-TrapDNA提取方法，该法不但简单快速高效，而且在转基因小鼠培养和基因QTL作图等方面获得了较好的验证。现报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料剪取小鼠尾巴0.4～0.8cm，放入1.5mlEppendorf管中，当天用于基因组DNA提取或者放入-20℃冰箱保存数天也可，如需长期贮存，则应放入-80℃冰箱。　　1.2试剂DNA提取缓冲液［0.1MN

6、aCl,50mMTris-HCl(pH8.0),2.5mMEDTA,0.5%SDS］；蛋白酶K（100μg/ml）,使用前加入；8M醋酸钾；氯仿；100%乙醇；75%乙醇；TE或灭菌ddH2O。　　1.3操作步骤（1）根据样本数量配制DNA提取液：配制原则是10mlDNA提取缓冲液加2ml100μg/ml蛋白酶K。（2）取约50mg新鲜组织放入1.5mlEppendorf管中或冷冻在-80℃低温冰箱中的组织（心、肝、肾、脾、肌肉或尾巴）已预放好在1.5mlEppendorf管中，加入400ulDNA提取液，紧闭盖子，放在63℃温箱旋涡混合器上振荡约2

7、h，振荡速度250rpm，溶解基本上是完全的，仅留有少许尾骨残骸。（3）每管中加入75μl8M醋酸钾（4）在通风厨中向每支管子中加入0.5ml氯仿（5）摇匀后放入冰箱（4℃）＞15min（6）在高速离心机中5000rpm离心10min（7）移取上清到另一离心管中。吸取上清应尽可能地靠近分层界面（HMahogunin转基因试验小鼠尾巴，提取基因组DNA最终浓度大约为700ng～1100ng/μl，计算A260/A280值通常都在在1.7～1.8之间。通常情况下，把提取的DNA吸取10μl按1：10稀释直接应用于PCR扩增、Sothernblot、酶切转

8、染和测序。　　2结果　　C3H/HCJ-Mgrn1md转基因小鼠与C57BL/6小鼠杂交后传至第三代——杂合