pax-8基因在心脏发育中蛋白表达下调

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1、Pax-8基因在心脏发育中蛋白表达下调作者：倪秋明，章佳颖，来丹丹，褚茂平，王赛斌，黄晓燕，张怀勤，杨德业【摘要】目的:观察Pax-8基因在ALK3基因敲除小鼠心脏中的蛋白表达情况，探讨Pax-8基因在心脏发育中的作用。方法:基因芯片(microarray)和定量逆转录-聚合酶链反应测定ALK3基因的下游基因，免疫组化法检测13.5d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除小鼠胚胎中Pax-8蛋白的表达，连续病理切片及HE染色观察刚出生的Pax-8基因敲除小鼠的心脏形态。结果：在心脏特异的ALK3基因敲除小

2、鼠中，转录因子Pax-8基因mRNA的表达水平上被下调7.1倍。免疫组化结果显示：13.5d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠Pax-8基因在蛋白水平与杂合子相比也明显下调。Pax-8基因敲除小鼠纯合子有明显的室间隔和左心室肥厚，心脏呈球形。结论:Pax-8基因是ALK3基因的下游基因，与心脏发育有密切关系。【关键词】Pax-8基因；室间隔缺损；免疫组化；蛋白表达Abstract:Objective:ToinvestigatethelevelofPax-8proteinexpression

3、inthecondi-tionalALK3kockoutmiceheartandstudytheroleofPax-8geneinthecardiacdevelopment.Methods:ThemicroarrayandrealtimequantitativeRT-PCRwere10usedtoinvestigatethedown-streamgenesofALK3.ImmunohistochemicaltechnologywasusedtodetectthelevelofPax-8proteine

4、xpressioninthe13.5dheartderivedfroma-MHCCre+/-，ALK3F/-anda-MHCCre+/-，ALK3F/+mice.TostudythecontributionofPax-8geneinthecardiacdevelopment，theheartderivedfrompax-8kockoutmicewasoverviewedusingconsecutivepathologicalsectionandHEstainingmethod.Results:Thel

5、evelofPax-8mRNAexpressionwasdown-regulated7.1foldintheembryonicheart(11.5days)ofa-MHCCre+/-，ALK3F/-.ThelevelofPax-8proteinexpressionwasalsoremarkablydown-regulatedintheembryonicheart(13.5days)ofa-MHCCre+/-，ALK3F/-.Theheartofpax-8KO-/-micebecamespheroida

6、l，theleftventricleenlarged，leftventricularwallandinterventricularseptumthickened，papillarymusclesintheleftventricleenlarged.Conclusion:Pax-8geneisthecardiac-specificALK3downstreamgene.Pax-8mayplayimportantrolesinthecardiacdevelopment.Keywords:Pax-8gene；

7、ventricularseptaldefect；immunohistochemistry；proteinexpression先天性室间隔缺损的发病机制尚不十分清楚。近年来，美国Schneider教授使用a-MHC10Cre+loxP系统[1](心脏特异性敲除系统)对心脏ALK3基因进行特异性地敲除，ALK3基因敲除的纯合子小鼠死于胚胎中期，并有室间隔缺损、心内膜垫和肌小梁发育不良[2]。然而，ALK3基因是与心脏发育有关的比较上游的基因。为了研究ALK3下游的并有心脏特异性的基因，在ALK3基因敲除和

8、Pax-8基因敲除小鼠模型上，观察Pax-8基因在心脏中的蛋白表达情况，以探讨Pax-8基因在心脏发育中的作用。1材料和方法1.1动物20只a-MHCCre+/-、ALK3+/-（a-MHC为启动子的Cre重组酶转基因杂合子，ALK3系统基因敲除的杂合子小鼠）和20只ALK3F/F（在ALK3基因第2个外显子两端插入loxP序列的小鼠）的C57小鼠(由美国Schneider教授提供)交配，可得到在心脏纯合子ALK3基因敲除(a-MHCCre+/-、ALK