噻克硝唑对厌氧菌的体内外抗菌活性

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1、噻克硝唑对厌氧菌的体内外抗菌活性作者：刘蓉　谢芬管晓琳周黎明【摘要】目的：考察及评价噻克硝唑体内外对临床分离厌氧菌的抗菌活性。方法：采用琼脂二倍稀释法测定噻克硝唑、甲硝唑、替硝唑对临床分离的165株厌氧致病菌的MIC。采用体内保护实验测定噻克硝唑的体内抗菌活性。结果：（1）体外实验证明，噻克硝唑具有较强的抗菌活性，其对革兰氏阴性厌氧菌抗菌活性略强于对革兰氏阳性厌氧菌的抗菌活性。（2）噻克硝唑体内试验也呈现较强的抗厌氧菌作用，略强于甲硝唑、替硝唑。结论：噻克硝唑具有广谱抗厌氧菌作用。【关键词】噻克硝唑；厌

2、氧菌噻克硝唑属5硝基咪唑类药物，于80年代在国外上市。主要用于治疗原虫感染，噻克硝唑与甲硝唑、替硝唑、奥硝唑相比，具有半衰期长，作用强，使用方便等特点［1］。本实验考察及评价噻克硝唑体内外对临床分离厌氧菌的抗菌活性。1材料与方法1.1实验材料8实验菌株：临床分离菌株：脆弱拟杆菌：20株；吉氏拟杆菌：20株；卵圆形拟杆菌：20株；普通类杆菌：20株；产黑拟杆菌：20株；牙龈卟唑单孢菌：10株；见核梭杆菌：10株；多形拟杆菌：10株；产气荚膜杆菌：5株；韦荣氏球菌：10株；中间型链球菌：10株；厌氧消化链

3、球菌：10株。共165株质控菌：脆弱拟杆菌ATCC25285。由四川大学华西口腔医院赠送。以上菌株均为2004年于成都、北京地区临床医院普通外科、妇科及口腔临床分离的厌氧致病菌。实验动物：昆明种小白鼠，贰级动物（清洁级）体重：1822克，雌雄各半。实验药品：噻克硝唑（云南安水制药有限公司提供，生产批号：20040301）；甲硝唑（中国药品生物制品检定所提供，生产批号：10336）；替硝唑（四川科伦药业股份有限公司提供，生产批号：E04072215）。实验仪器：厌氧培养箱：浙江义乌冷冻机械厂生产，DY

4、2型；电子分析天平；微量加样器：德国eppendorf,100μl,100μl。培养基：BHIS琼脂培养基为上海生物制品研究所产品，用前加入VitK1Hemin液和10％兔血；TS肉汤培养基（TrypticsoyBroth）：为Difco公司商品，用前加入VitK1Hemin液。1.2实验方法［2］1.2.1培养基的制备将受试药用无菌蒸馏水溶解，并稀释至浓度为25608mg/L的贮存液，在20℃保存备用。正式试验开始前用液体培养基将贮存药液配成二倍递减的系列药液，其浓度分别2560、1280、

5、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625和0.31、0.015、0.008mg/L。分别取2ml不同浓度的实验药液加入冷却至48℃～50℃的BHIS琼脂培养基18mL，在灭菌小烧杯中混匀后倾注无菌平皿中。系列含药琼脂平皿的药物终浓度为256，128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.0625和0.31、0.015、0.008mg/L。1.2.2MIC测定用接种菌环分别挑取48hBHIS琼脂平皿上的细菌培养物接种入BHIS液体

6、培养基;用0.5McFarland标准管校正菌液浓度，取0.01～0.03mL（105CFU/ml），用多点接种器将上述受试菌液接种到含各种不同浓度的受试药物的平皿表面，置35℃厌氧箱（厌氧培养大气条件是H210%，N280%，CO210%）培养48h观察记录结果，未见细菌生长的药物最低浓度为其最低抑菌浓度（MIC）。1.2.3体内抗菌活性测定8试验菌液的制备实验前挑取受试菌落接种在厌氧菌分离琼脂平板，分别置入需氧、厌氧环境（H210%，N280%，CO210%）培养（3～5℃，48h）。需氧对照不生长

7、的菌株，厌氧环境生长良好的菌株用于本实验。挑取厌氧环境中生长良好的2～3个单菌落接种于厌氧菌液体培养基中，35℃培养24h，将该菌液用5％灭菌干酵母液适当稀释备用。细菌感染菌量设定取上述厌氧环境生长良好的菌液，用5％灭菌干酵母液稀释（101、102、103、104），取健康小鼠20只，均分4组，每组5只鼠，分别腹腔注射上述系列稀释菌液，0.5ml/只，感染后观察并记录小鼠死亡（或存活数），致小鼠100％死亡的感染菌量为最小致死菌量（MLD，MinimalLethadDose），以该菌量作为体内感

8、染实验的感染菌量。同时做活菌计数，求出实际细菌量（CFU·ml-1）。给药剂量设计参考该类化合物体内实验文献数据，进行预试验，以求出0％和100％的有效剂量，在该剂量范围内，将受试药物设5～6个剂量组。组间距为1∶0.7。体内保护实验首先按预试结果，将试药对照药物分别设5～6个剂量组，取健康昆明种小白鼠按体重、性别均匀分组，每组10只鼠（雌雄各半），分别腹腔感染1MLD的受试菌液0.5ml/鼠，感染后即刻再分别静脉注射受试药物，0.25ml