3.抗菌药物的体内外活性评价方法

《3.抗菌药物的体内外活性评价方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、抗菌药物活性评价方法研究进展山东省千佛山医院　孙淑娟CONTENTS抗菌药物敏感性实验测定方法MIC、MBC测定杀菌曲线联合药效测定血清杀菌活性/滴度抗菌药物对细菌形态影响研究进展抗菌药物抗菌活性评价方法体外：药物敏感性实验MIC/MBC测定时间-杀菌曲线联合药敏试验抗生素后效应：PAE体内：ED50（动物）临床有效率与细菌清除率抗生素后效应血清杀菌滴度(SBA)一、药物敏感性实验测定方法MIC/MBC测定NCCLS：NationalCommitteeforClinicalLaboratorySta

2、ndardsClinicalLaboratoryStandardsInstitute(CLSI)药物敏感试验：MIC测定纸片法:K-B法(定性法）定量纸条法（E-test）稀释法：常量法：试管稀释法(1－2ml)微量法：肉汤稀释法(0.1-0.2ml)：肉眼观察、OD、MTT、XTT琼脂稀释法1.纸片法（DiskDiffusionAssay)又称K-B法（Kirby-Bauer)：利用含一定浓度抗菌药物的滤纸片贴附在涂布受试菌的琼脂平板，孵育18-24h后，据抑菌圈的大小判定细菌对抗生素的敏感性，该

3、法简便，是临床抗菌药物敏感性检测定性的常用方法；菌液浓度一般为104cfu/ml。抑菌圈直径解释标准。报告(定性）：针对抑菌圈直径测量值报告敏感、中介、耐药。影响因素：琼脂成分、孵化温度、细菌接种量、抗菌药物纸片含量。2.EpsilometerTest特点：新综合了定性（易操作）及定量的特点，可从含药梯度条上能直接读出MIC值费用高限制了其应用。3.稀释法MIC测定是将细菌与系列稀释的抗菌药物共同孵育18－24h，观察能抑制细菌生长的最低浓度，MBC则是在此条件下，使受试菌99.9%被杀灭的最低药物

4、浓度。MBC测定需要进行菌落计数。实验用细菌浓度：1～5×105CFU/ml(colonyformingunits)MIC测定方法及终点MIC终点：100%抑制，细菌80%抑，真菌50%研究肉眼观察比浊(类OD)比色：采用氧化-还原指示剂进行比色分析的终点判读方法噻唑蓝（MTT)，甲基四氮盐（XTT)。结果影响因素培养基及其所含阳离子（生理水平的钙、镁离子影响氨基糖苷类的抗菌活性、pH值、血清蛋白)菌液浓度培养温度与时间观察与测定方法药敏报告的临床意义敏感(SensitiveS)：表明该菌株所致感染

5、，用此药物正常剂量，除非存在禁忌症。中介(IntermediumI):此菌所致的感染可以用此药，但需加大剂量。耐药（ResistanceR):此菌所致的感染用此药无效。药敏试验折点的建立MIC的分布药代动力学和药效学定MIC的折点临床疗效和细菌清除率抑菌圈直径的分布定抑菌圈折点统计学的线性回归计算错误率：尽可能减少极重要误差(假敏感率)MIC的局限性体外抗菌药物敏感测定虽能反应抗菌药物的抗菌活性，但只表明抗菌药物在其一定浓度的活性，不能体现抗生素杀菌的动态过程及不同浓度抗菌药物的抗菌过程。多用于科研

6、MIC测定-稀释法真菌NCCLSM-27A，CLSIM-27A念珠菌NCCLSM-27A2，CLSIM-27A2M38-A霉菌菌液浓度：0.5～2.5×103cfu/ml二、时间-杀菌曲线法将受试菌与一定浓度的抗生素共同孵育，在不同时间点进行菌落计数，以时间为横坐标，细菌数的对数值为纵坐标所绘制的曲线；可用不同抗生素浓度绘制多条杀菌曲线，如1/4，1/2，1，2，4倍MIC，杀菌曲线的斜率反应出药物对细菌的杀灭速度。曲线一般分为三个时相：延迟时、杀菌期和恢复再生长期。可比较不同抗菌药物的杀菌速度和

7、持续时间。杀菌曲线通过杀菌曲线可以发现，在低于MIC值时，杀菌曲线斜率为正值，随着药物浓度的增加，斜率逐渐减小；当抗生素浓度为MIC时，杀菌曲线有两种情况，一为曲线斜率呈负值，另一为曲线近水平状，表明前者有杀菌作用，为杀菌剂，而后者则只是具有抑菌作用，为抑菌剂。抗菌药物分类---抗菌效果抑菌剂&杀菌剂杀菌曲线对于杀菌剂，随着浓度逐渐增加杀菌曲线斜率的负值也逐渐加大，但当抗菌药物浓度增加到一定程度后（如4MIC），再增加其浓度又有两种可能，一则曲线斜率随之增加，另一曲线斜率不在增加，前者杀菌活性与浓度

8、有密切关系，而后者杀菌作用不完全依赖于抗生素浓度，分别称这两类抗生素为浓度依赖性抗生素与浓度非依赖性抗生素或时间依赖性抗生素。杀菌曲线与抗菌药物PK/PD分类1.52.53.54.55.56.57.58.59.502468control1/4MICMIC4MIC16MIC64MICTime（h）LogCFUTobramycinCiprofloxacinTicarcillin三、联合药敏测定方法1.棋盘法-微量稀释法图2棋盘法表现两药协同作用联合药敏--棋盘法结果评价通