实时定量逆转录聚合酶链反应检测大肠癌患者术前外周血 ck20 mrna和cea mrna的临床意义

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1、实时定量逆转录聚合酶链反应检测大肠癌患者术前外周血CK20mRNA和CEAmRNA的临床意义作者：周海茵，葛成华，王世伟，叶古祥，唐文贤，赵旭鸿，范珍妮【摘要】目的探讨大肠癌患者外周血CK20mRNA和CEAmRNA的表达及其临床意义。方法采用实时定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术，对68例大肠癌患者及30例健康志愿者（对照组）术前外周血CK20mRNA和CEAmRNA水平进行检测。结果在对照组中CK20mRNA和CEAmRNA均无表达，而在大肠癌组中CK20mRNA阳性表达率为45.6%，CEAmRNA阳性表达率为39.7%，二者联合检测阳性率为55.9%，较单项检测

2、阳性率高（P>0.05），二者的表达与性别、肿瘤部位和肿瘤分化程度无明显相关，与肿瘤临床分期、淋巴结转移和肝脏转移明显相关。结论CK20mRNA和CEAmRNA可作为大肠癌细胞血行播散的标志，联合检测有助于提高肿瘤微转移的检出率及判断预后。【关键词】大肠肿瘤；微转移；外周血［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCK20mRNAandCEAmRNAinperipheralbloodofpatientswithcolorectalcanceranditsclinicalsignificance.MethodsCK209mR

3、NAandCEAmRNAweredetectedin68patientswithcolorectalcancerbeforeoperation,30healthadultsbyQRT-PCR.ResultsCK20mRNAandCEAmRNAwereundetectedinthecontrolgroup,thepositiverateofCK20mRNAamongcolorectalcancerpatientswas45.6%,andofCEAmRNAwas39.7%.Thepositiverateofcombinationdetectionwas55.9%.Itwashighe

4、rthantherateofdetectionalone.Therewasnostatisticallysignificantdifferenceofpositiveratebetweentwodetectionmethods.TheexpressionofCK20mRNAandCEAmRNAwerenotsignificantlycorrelatedwithsexofpatients,theplaceofthetumorordifferentiationlevelofcancercells,butcorrelatedwithclinicalstage,lymphnodesmet

5、astasisandlivermetastasis.ConclusionCK20mRNAandCEAmRNAwereusefulmakerofblooddisseminationofcolorectalcancercellandthepositiverateofmicrometastasisbemayberaisedbycombinationdetection.TheexpressionofCK20mRNAandCEAmRNAmayberegardedasareferenceindicator.［Keywords］colorectalcancer;micrometastasis;

6、peripheralblood9大肠癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年升高趋势，其术后复发及远处转移率达20%～45%［1］。因此早期检测出循环癌细胞对判断肿瘤复发和转移及指导临床综合治疗有重要意义［2］。1对象与方法1.1研究对象68例大肠癌患者选自2007年1月～2008年3月在我院接受手术治疗并经病理确诊的患者，男39例，女29例，年龄26～88岁，中位年龄65岁。临床分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期24例，Ⅲ期27例，Ⅳ期11例。肿瘤分化程度：高分化腺癌26例，中分化28例，低分化11例，未分化3例。对照组30例健康志愿者来自同期我院健康职工。1.2仪器与试剂定量PCR

7、仪（美国生物应用公司ABI7500），Trizol试剂（上海闪晶分子生物科技公司），CK20mRNA和CEAmRNAPCR试剂盒（上海达为科生物科技公司）。1.3RNA提取采集对照组及大肠癌组患者术前肘静脉血5ml（草酸钾抗凝），1h内用淋巴细胞分离液分离有核细胞，将分离的有核细胞收集到1.5ml离心管中，12000rpm离心5min,弃上清，在沉淀中加入Trizol500μl,混匀置室温10min，加入氯仿200μl混匀，4℃10000rpm离心5min，吸取上层水相于1.5m