非小细胞肺癌患者外周血ta，cea mrna和ck19 mrna检测比较

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1、非小细胞肺癌患者外周血TA，CEAmRNA和CK19mRNA检测比较庞桂芬卢云涛杨林瀛杜新生刘怀深薛承岩白海洋【摘要】　　目的：探讨检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者血液中TA，CEAmRNA，CK19mRNA的临床意义，评价三者诊断NSCLC血液转移的应用价值.方法：NSCLC组74例，非肿瘤性呼吸系统疾病患者(疾病对照组)51例和健康人(健康对照组)36例，应用端粒末端重复序列扩增杂交酶联免疫检测技术检测TA，逆转录套式聚合酶链反应技术检测CEAmRNA和CK19mRNA.结果：NSCLC组血液TA，CEAmRNA和CK19mRNA阳

2、性率高于两个对照组(P0.01)，且TA和CEAmRNA的特异性和敏感性也高于CK19mRNA，但不同类型NSCLC检测3个指标结果的差异无统计学意义(P>0.05).结论：检测血液TA，CEAmRNA和CK19mRNA有助于发现NSCLC细胞血液转移，且TA和CEAmRNA的价值高于CK19mRNA，但此3个指标可能无助于鉴别NSCLC的类型.【关键词】癌非小细胞肺血液端粒末端转移酶癌胚抗原角蛋白RNA信使0引言非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的70%以上，约50%多的NSCLC患者在最初诊断时已有远处转移，预后较差.肺癌微转移是肺癌的

3、恶性标志和主要特征之一，也是导致治疗失败和患者死亡的主要原因.因此，明确肿瘤有无转移，对治疗决策的制订、预后评估等具有重要的指导意义，早期诊断和治疗肺癌微转移是提高肺癌治疗率、改善患者预后的有效途径.至今，对NSCLC早期转移、微转移、血行转移等的诊断仍没有令人满意的方法.研究提示，检测血液中端粒酶活性(TA)和癌胚抗原信使核糖核酸(CEAmRNA)指标对了解NSCLC血液转移有较大帮助，且作用优于CK19mRNA.1对象和方法1.1对象我院住院NSCLC患者74（男47，女27）例，年龄37～75岁，其中腺癌24例，鳞癌22例，腺鳞癌14例，大

4、细胞肺癌14例.非癌性肺部疾病患者(疾病对照组)51（男29，女22）例，年龄16～76岁，包括间质性肺炎9例，支气管扩张9例，肺结核11例，肺囊肿11例，炎性假瘤11例.均经手术或穿刺活检病理证实诊断.健康志愿者(健康对照组)36（男20，女16）例，年龄18～75岁.对肿瘤患者及检测指标阳性者通过通信、电话形式进行随访0.5～3a.应用柠檬酸钠抗凝剂真空采血管采集静脉血液，分离、提取有核细胞，预冷生理盐水充分洗涤有核细胞，以备检测TA，CEAmRNA及CK19mRNA.如不能即时检测，应尽快提取血液有核细胞，分装后封存于-70℃.1.2方法应

5、用端粒末端重复序列扩增杂交酶联免疫检测技术(TRAPHybELISA)检测TA，试剂盒为华美生物工程公司商品试剂盒.检测操作经过端粒酶催化端粒末端重复序列复制、PCR扩增、扩增产物微孔板杂交、酶联免疫测定等步骤，于450nm波长测定各反应孔A值，以检测孔A值>2.0倍阴性对照孔A值为端粒酶阳性结果.应用逆转录套式聚合酶链反应技术(RTNPPCR)检测CEAmRNA和CK19mRNA，CEAmRNA检测试剂盒为上海复星生物技术有限公司的商品试剂盒，CK19mRNA检测试剂盒由北京美迪科生物科技有限公司提供.操作经RNA模板提取

6、、逆转录合成cDNA、套式PCR扩增、扩增产物琼脂糖凝胶电泳、溴化乙啶染色、紫外检测等步骤，以出现与试剂盒提供的阳性对照同齐的核酸电泳亮带为阳性结果.实验按试剂盒操作说明书进行.统计学处理：组间比较应用χ2检验，同组内两种检测结果比较应用配对χ2检验法.2结果2.1外周血TA，CEAmRNA和CK19mRNA变化在疾病对照组，2例TA阳性结果分别来自肺结核和炎性假瘤；CEAmRNA阳性结果分别为肺结核2例，炎性假瘤1例；CK19mRNA的阳性结果为肺结核2例，炎性假瘤2例，肺囊肿2例，间质性肺炎1例.健康对照组的2例CK19mRNA阳性者，未见任

7、何有意义的检查及既往发现，其中，1例于1，3，6，12mo后的4次复查均呈阴性结果，另1例于1，3，6，12mo后的4次复查中有1次(3mo后)呈阳性结果，其余均阴性.NSCLC组的各结果与两个对照组比较，差别均有统计学意义(TA，CEAmRNA和CK19mRNA，与疾病对照组比较χ2=44.218，42.789和8.345；与健康对照组比较χ2=38.834，40.348和11.925，P0.01).在NSCLC组内，TA与CEAmRNA的差别无统计学意义(χ2=0，P>0.05)，双阳性的有42例；TA与CK19mRNA的差别有统计学意

8、义(χ2=12.960，P0.01)，双阳性的有26例；CEAmRNA与CK19mRNA的差别有统计学意义(χ2=16.409，P0.0