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1、非小细胞肺癌患者外周血TA，CEAmRNA和CK19mRNA检测比较姓名：2014年6月25日非小细胞肺癌患者外周血TA,CEAmRNA和CK19mRNA检测比较作者：庞桂芬卢云涛杨林瀛杜新生刘怀深薛承岩白海洋【摘要】目的：探讨检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血液中TA,CEAmRNA,CK19mRNA的临床意义，评价三者诊断NSCLC血液转移的应用价值.方法：NSCLC组74例，非肿瘤性呼吸系统疾病患者(疾病对照组)51例和健康人(健康对照组)36例，应用端粒末端重复序列扩增杂交酶联免疫检测技术检测TA，逆转录套式聚合酶链反应技术检测CEAmRNA和CK19mRNA.结果：
2、NSCLC组血液TA,CEAmRNA和CK19mRNA阳性率高于两个对照组(P0.01),且TA和CEAmRNA的特异性和敏感性也高于CK19mRNA,但不同类型NSCLC检测3个指标结果的差异无统计学意义(P0.05).结论：检测血液TA,CEAmRNA和CK19mRNA有助于发现NSCLC细胞血液转移，且TA和CEAmRNA的价值高于CK19mRNA,但此3个指标可能无助于鉴别NSCLC的类型.【关键词】癌非小细胞肺血液端粒末端转移酶癌胚抗原角蛋白RNA信使0引言非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的70%以上，约50%多的NSCLC患者在最初诊断时己有远处转移，预后较差.肺
3、癌微转移是肺癌的恶性标志和主要特征之一，也是导致治疗失败和患者死亡的主耍原因.因此，明确肿瘤有无转移，对治疗决策的制订、预后评估等具有重要的指导意义，早期诊断和治疗肺癌微转移是提高肺癌治疗率、改善患者预后的有效途径.至今，对NSCLC早期转移、微转移、血行转移等的诊断仍没奋令人满意的方法.研究提示，检测血液中端粒酶活性(TA)和癌胚抗原信使核糖核酸(CEAmRNA)指标对了解NSCLC血液转移有较大帮助，且作用优于CK19mRNA.1对象和方法1.1对象我院住院NSCLC患者74（男47，女27）例，年龄37〜75岁，其中腺癌24例，鱗癌22例，腺鳞癌14例，大细胞肺癌14例.
4、非癌性肺部疾病患者（疾病对照组）51（男29,女22）例，年龄16〜76岁，包括间质性肺炎9例,支气管扩张9例，肺结核11例，肺囊肿11例，炎性假瘤11例.均经手术或穿刺活检病理证实诊断.健康志愿者（健康对照组）36（男20,女16）例，年龄18〜75岁.对肿瘤患者及检测指标阳性者通过通信、电话形式进行随访0.5〜3a.应用拧檬酸钠抗凝剂真空采血管采集静脉血液，分离、提取有核细胞，预冷生理盐水充分洗涤有核细胞，以备检测TA,CEAmRNA及CK19mRNA.如不能即时检测，应尽快提取血液有核细胞，分装后封存于-70°C.1.2方法应用端粒末端重复序列扩增杂交酶联免疫检测技术（T
5、RAPHybELISA）检测TA,试剂盒为华美生物工程公司商品试剂盒.检测操作经过端粒酶催化端粒末端重复序列复制、PCR扩増、扩堉产物微孔板杂交、酶联免疫测定等步骤，于450rnn波长测定各反应孔A值，以检测孔A值2.0倍阴性对照孔A值为端粒酶阳性结果.应用逆转录套式聚合酶链反应技术（RTNPPCR）检测CEAmRNA和CK19mRNA，CEAmRNA检测试剂盒为上海复星生物技术有限公司的商品试剂盒，CK19mRNA检测试剂盒由北京美迪科生物科技有限公司提供.操作经RNA模板提取、逆转录合成cDNA、套式PCR扩增、扩增产物琼脂糖凝胶电泳、溴化乙啶染色、紫外检测等步骤，以出现与
6、试剂盒提供的阳性对照同齐的核酸电泳亮带为阳性结果.实验按试剂盒操作说明书进行.统计学处理：组间比较应用X2检验，同组内两种检测结果比较应用配对X2检验法.2结果2.1外周血TA,CEAmRNA和CK19mRNA变化在疾病对照组，2例TA阳性结果分别来自肺结核和炎性假瘤；CEAmRNA阳性结果分别为肺结核2例，炎性假瘤1例；CK19mRNA的阳性结果为肺结核2例，炎性假瘤2例，肺囊肿2例，间质性肺炎1例.健康对照组的2例CK19mRNA阳性者，未见任何有意义的检查及既往发现，其中，1例于1,3,6,12mo后的4次复查均呈阴性结果，另1例于1，3,6，12mo后的4次复查中有1次
7、(3mo后)呈阳性结果，-其余均阴性.NSCLC组的各结果与两个对照组比较，差别均有统计学意义(TA,CEAmRNA和CK19mRNA,与疾病对照组比较％2=44.218,42.789和8.345;与健康对照组比较％2=38.834,40.348和11.925，P0.01).在NSCLC组内，TA与CEAmRNA的差别无统计学意义(x2=0，P0.05),双阳性的有42例；TA与CK19mRNA的差别有统计学意义(%2=12.960,P0.01),双阳性的有26例；CEAmRNA与CK19m
