加味麻杏石甘汤对哮喘大鼠平喘作用的实验研究

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1、加味麻杏石甘汤对哮喘大鼠平喘作用的实验研究【摘要】目的:探讨加味麻杏石甘汤(MG)对卵清蛋白所致实验大鼠支气管哮喘血清及肺组织中NO、ET-1的调节作用。方法:采用腹腔注射卵蛋白和灭活百日咳杆菌,制成大鼠哮喘模型。在此基础上,各组模型鼠分别给予不同的药物“治疗”,2周后处死测定各组大鼠血浆及肺组织NO、ET-1含量。结果:模型组血清及肺组织中NO、ET-1含量均增高，各用药组均有所降低。各组血清NO含量相比差异无统计学意义(P>0.05)，肺组织NO含量均降低，与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。模型组血浆及肺组织ET-1含量与正常组相比明显增高，差异有统计学

2、意义(P<0.01);经药物治疗后，各组与模型组比均能明显降低血浆ET-1含量(P<0.01)。肺组织中NO含量与肺组织ET-1含量有明显相关性(r=0.689，P<0.01)。结论:通过下调血浆和肺组织NO、ET-1的合成和释放,从而减轻哮喘气道炎症及气道上皮重建,降低气道高反应性,可能是MG治疗哮喘的机制之一。【关键词】加味麻杏石甘汤;支气管哮喘;NO;ET-17　支气管哮喘(简称哮喘)是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞等多种炎症细胞参与的非特异性慢性气管炎症。加味麻杏石甘汤是临床上治疗儿童支气管哮喘的有效经验方剂,临床观察小儿哮喘急性发作时服用屡获良效。本研

3、究的主要目标是观察哮喘模型鼠血浆及肺组织中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的含量变化,探讨加味麻杏石甘汤(MG)治疗哮喘的作用机理，为MG治疗小儿哮喘的临床应用提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1动物分组及造模60只雄性SD大鼠,体重180～200g,日龄28～42d(华中科技大学实验动物中心提供),随机分为6组：正常对照组、哮喘模型组、MG小剂量组、MG大剂量组、地塞米松组、MG与地米联合组。参照崔龙苹等[1]介绍的造模方法，除正常对照组外，其余5组于第1天、第5天和第8天分3次腹腔注射抗原液1mL致敏。第14天开始将大鼠放入自制的不完全封闭的有机玻璃箱内，予1%卵蛋白

4、(OVA)溶液用超声雾化器喷雾激发，每天1次，每次20min，共激发12d。正常对照组用等量的生理盐水进行激发。实验第17天开始给药，每次雾化吸入激发前半小时给予药物干预，中药组给予灌胃MG每天4.24g/kg，地塞米松组给予灌胃地塞米松每天0.75mg/kg，以上各组大鼠给药容量均为10mL/kg，正常对照组和哮喘模型组灌胃等量生理盐水，均每日1次,共8d。　　1.2主要仪器402型雾化吸入器(上海合力医疗器械厂);γ-放射免疫计数器FJ-2021(西安二六二厂)7　　1.3实验药物加味麻杏石甘汤由炙麻黄6g、生石膏24g、炒杏仁8g、炒黄芩12g、瓜蒌12g、蝉蜕10g、地龙12

5、g、前胡10g、炙枇杷叶12g、甘草4g组成。水煎，过滤，MG小剂量组浓缩至每毫升含生药2.12g(相当于临床30kg儿童用量的10倍)，MG大剂量组浓缩至每毫升含生药4.24g(相当于临床30kg儿童用量的20倍)，密封于无菌量瓶中，4℃储存备用。地塞米松片(0.75mg×100片)研细末，用蒸馏水配成0.1875mg/mL的溶液。　　1.4标本采集与测定　　1.4.1血浆采集各组大鼠断头取血，用一空白试管取血3～4mL，静置30min后，在4℃条件下低温离心(3000r/min)15min，取血清置于-20℃冰箱保存待测NO;另用含10%EDTA二钠和抑肽酶40μL(加入适量抑肤

6、酶用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解)的试管取血2mL，混匀后，在4℃条件下离心(3000r/min)10min，取血浆存于-20℃冰箱保存待测ET-1。　　1.4.2肺组织匀浆制备取少量右肺组织用冰生理盐水冲洗后称重0.1g左右，按1∶9加4℃生理盐水，用玻璃匀浆器在4℃条件下制备组织匀浆，3000r/min离心10min，提取上清液置于-20℃冰箱保存待测。测定前，使样本置于室温中复融，再次于4℃下离心(3000r/min)5min，取上清液测NO、ET-1水平。7　　1.4.3血浆与肺组织中NO、ET-1含量测定NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所，ET-1购自解放军总医院

7、所科技开发中心，放免指标操作按说明书进行。NO测定采用硝酸还原法测定，ET-1测定采用放射免疫分析法。　　1.5数据处理所有数据用均数±标准差(x±s)表示，用SPSS11.5统计软件进行处理。数据用单因素方差分析(One-WayANOVA)，相关性分析采用Pearson方法,以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1各组血清及肺组织NO含量变化模型组血清NO含量增高，各用药组均有所降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组肺