nm23h1等位基因缺失与喉癌转移相关性研究

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1、nm23H1等位基因缺失与喉癌转移相关性研究作者：徐艳萍金春顺孙立群许亚辉孟粹达【摘要】目的从基因水平探讨nm23H1等位基因缺失与喉癌转移的相关性。方法采用Southern杂交技术检测30例喉癌组织中nm23H1等位基因缺失情况。结果颈淋巴结转移组的喉癌组织中nm23H1等位基因缺失率为44.4%(4/9)，明显高于无颈部淋巴结转移组4.8%(1/21)，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。nm23H1等位基因缺失与临床分型、分期及病理分化程度无显著性相关(P>0.05)。结论nm23H1基因在抑制喉癌转移方面起重要作用，nm23H1等位基

2、因缺失可作为喉癌转移潜能及预后判定的重要指标之一。【关键词】喉肿瘤;肿瘤转移;nm23基因;基因缺失nm23基因目前被认为是最有意义的转移抑制基因，由美国国立癌症研究所Steeg等〔1〕于1988年首先从K1735鼠恶性黑色素瘤细胞株中，用消减杂交法分离鉴定出来的。相关研究报道nm23基因与黑色素瘤、肺癌、肝癌等多种人类肿瘤转移相关〔1～3〕，但关于nm23H1等位基因缺失与喉癌转移的关系，目前国内未见报道。本研究应用Southern杂交技术检测国人喉癌组织中nm238H1等位基因缺失情况，并探讨其与喉癌转移的相关性。　　1材料与方法　　1.1一般资料30例喉癌组织及

3、相应的正常喉黏膜组织取自本院耳鼻喉科住院手术病人，均经病理证实为喉鳞状细胞癌。术中取喉癌组织及距肿瘤边缘≥1cm的正常黏膜，标本置于-80℃保存备用。男21例，女9例，年龄40～76岁，平均年龄61岁，按1987年国际抗癌协会(UICC)的TNM解剖分区、分期及分级标准。声门上型26例、声门型4例;临床分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期7例，Ⅲ期10例，Ⅳ期10例;肿瘤分化程度：高分化12例，中分化12例，低分化6例。颈淋巴结转移组9例均为术前即有淋巴结转移(术后经病理证实)，或术后1年内又出现颈淋巴结转移的病人，非转移组21例，为原发肿瘤切除后1年内无局部复发和颈部淋巴结转移的病人。　

4、　1.2探针及同位素标记试剂盒nm23H1cDNA探针由北京医科大学提供，片段长度900bp，BamHⅠ酶切，随机引物同位素标记试剂盒为Sigma公司生产。　　1.3Southern印迹法分析提取所有癌组织、正常黏膜标本的DNA，取20μgDNA经BglⅡ酶切完全后，0.8%琼脂糖凝胶电泳，用毛细管转移法将凝胶中的DNA转移至尼龙膜上。42℃预杂交248h,预杂交液成分为25mmol/LK3PO4，5×SSC，0.5%SDS，5×Denhardt，50μg/ml变性的鲑精DNA，50%甲酰胺。用随机引物标记法将α32PdCTP标记到nm23H1cDNA探针上。过柱纯

5、化探针，热变性后加入到预杂交袋内，42℃杂交24h。用2×SSC、0.1%SDS洗膜5min，改用0.1×SSC、0.5%SDS在室温、42℃及65℃洗膜至杂交带区与膜本底的放射性显出差异，将尼龙膜与X线胶片置暗盒内，-70℃放射自显影10～14d。显影、定影，读片。　　1.4统计学分析采用fisher检验及秩和检验。　　2结果　　2.1基因组DNA酶切结果上述组织的基因组DNA经BglⅡ酶切，与nm23H1cDNA探针Southern杂交显示，在杂合子出现7.6kb及2.3kb两条杂交带，而在纯合子则为单7.6kb或单2.3kb杂交带，与正常黏膜组织相比癌组织杂交带缺失

6、则为等位基因缺失。5例喉癌病人存在nm23H1等位基因缺失，其中颈淋巴结转移组喉癌组织中的4例及相应的淋巴结中的3例存在nm23H1等位基因缺失;非转移组喉癌组织中1例存在nm23H1等位基因缺失，均为杂合性缺失。　　2.2nm23H1等位基因缺失与喉鳞癌临床疗效的关系nm238H1等位基因缺失与肿瘤的临床分型、分期及病理分化程度无显著相关性(P>0.05)，见表1。转移组中4例喉癌组织存在nm23H1等位基因缺失，而非转移组21例中仅1例喉癌组织存在nm23H1等位基因缺失，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。　　表1nm23H1等位基因

7、缺失与喉鳞癌病理及临床特点的关系　　等位基因缺失无等位基因缺失P值临床分型声门上型521>0.05声门型04临床分期Ⅰ03>0.05Ⅱ16Ⅲ37Ⅳ19病理分化程度高111>0.05中39低15喉癌组织转移组45<0.05非转移组120　　3讨论　　nm23基因是近年来分离鉴定的一种与肿瘤转移表型抑制相关的基因〔1〕，现已鉴定出两种亚型即nm23H1和nm23H2。nm23H1定位于17号染色体的长臂(17q22)，在转移性肿瘤中nm23H2的表达减少不如nm23H1明显。nm23