培养人视网膜色素上皮细胞脂褐素形成对胞内钙离子和细胞活力的影响

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1、培养人视网膜色素上皮细胞脂褐素形成对胞内钙离子和细胞活力的影响作者：张乐　惠延年　马丽娜　王静波　刘晓娟　王雨生【摘要】　　目的：观察培养人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial，RPE)细胞在吞噬牛光感受器外节(photoreceptoroutersegments，POS)膜盘形成脂褐素的过程中，胞内钙离子浓度及细胞活力的变化。方法：将培养人RPE细胞与制备的2×1010/L牛POS共培养，在形成脂褐素过程中，用钙荧光指示剂Fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(laserscanni

2、ngconfocalmicroscope，LSCM)观察培养0.5，1，2，4和8d时间点胞内钙离子的变化；用MTT比色法观察培养0.5，1，2，4和8d的细胞活力。结果：对照组RPE细胞内钙离子荧光强度为165.4±29.9U，而与POS培养的细胞内钙离子荧光强度在0.5d达到高峰值777.3±63.9(P<0.01),4d下降至316.9±36.1U(P<0.01)，但至8d仍维持在较高值334.1±30.6U(P<0.01)。细胞内脂褐素自发荧光平均强度在培养8d达到350.2±26.5U(

3、P<0.01)，而对照组为105.5±15.4U。MTT法显示共培养0.5，1，2，4和8d细胞相对增殖率分别为4.9%，84.4%，54.7%，21.1%和11.2%，细胞增殖活力在共培养1d达到最大值，之后下降。结论：在培养人RPE细胞和牛POS共培养形成脂褐素过程中，钙离子大量内流，细胞增殖活力增加。12【关键词】脂褐素　视网膜色素上皮细胞　钙离子　活力　MTT　光感受器外节　　Effectsoftheformationoflipofuscinonthecalciumandtheactivityofcu

4、lturedhumanretinalpigmentepithelialcellsAbstractAIM:Toobservethecalciumfluxandtheactivityoftheculturedhumanretinalpigmentepithelial(RPE)cellsintheformationoflipofuscinwhichresultsfromRPEphagocytizingthemembranousdiscsshedbybovinephotoreceptoroutersegments(POS)

5、.METHODS:TheculturedhumanRPEcellswerefedwith2×1010/LbovinePOS.Duringtheformationofthelipofuscin,thecellswereanalyzedwiththefluoresenceCa2+dyeFluo-3/AMandalaserscanningconfocalmicroscope(LSCM).Theactivityofcellswasmeasuredwithtetrazoliumsalt(MTT)assayfor12hours

6、,1,2,4and8days.RESULTS:Calciumfluorescenceintensity(CFI)ofnormalRPEcellswas165.4±29.9U.ButincellswerefedwithPOS,itreachedthepeakwith777.3±63.9U(P<0.01)for12hoursanddecreasedto316.9±36.1U(P<0.01)for4days,thenmaintainedahighlevelof334.1±30.6Ufor8days.Theme

7、an12autofluoresenceintensityofthelipofuscininRPEcellswas350.2±26.5U(P<0.01)for8dcomparedto105.5±15.4Uincontrols.MTTassayshowedthattheproliferationrateofthecellsfedwithPOSwere4.9%,84.4%,54.7%,21.1%and11.2%for12hours,1,2,4and8days,respectively.TheactivityofRP

8、Ecellsshoweditshighestlevelfor1dayandthendeclined.CONCLUSION:IntheformationofthelipofuscinwhenRPEphagocytizingbovinePOS,calciuminfluxtoRPEcellsmayplayanimportantroleinthegeneration