cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及统计分析

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1、Cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及统计分析【摘要】目的：探讨Cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及其在肿瘤的发生和发展中的作用。方法:　收集武汉大学人民医院病理科2006～2009年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40例,其中22例MF、7例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6例其他类型的T细胞淋巴瘤、5例B细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。采用免疫组织化学方法观察各组组织内Cdk2的表达。利用HPIAS2000图像分析系统测定Cdk2在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：皮肤淋巴瘤中Cdk2呈高表达;癌旁组织中Cdk2呈低

2、表达。图像分析结果显示：皮肤淋巴瘤与皮肤炎症病变之间Cdk2的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论：Cdk2异常高表达促进细胞增殖,从而在皮肤淋巴瘤发病过程中起重要作用。【关键词】皮肤淋巴瘤;Cdk2;免疫组织化学;图像分析在恶性淋巴瘤与假性淋巴瘤的淋巴结外病变中,皮肤是最常受侵犯的器官,虽然皮肤淋巴瘤在某些方面比较特殊,但仍属于淋巴瘤一类疾病,皮肤淋巴瘤是仅次于胃肠道的第二常见的淋巴结外淋巴瘤[1，2]。细胞周期与肿瘤发生、发展有密切关系,细胞周期的动态过程有赖于正、负调节因子控制。细胞周期素依赖性激酶(cyclindepend

3、entkinase,Cdk)在细胞分化、有丝分裂中起促进作用[3，4]。为探讨Cdk28与皮肤淋巴瘤的发生发展的关系及临床意义,本文采用免疫组化的方法对皮肤淋巴瘤中Cdk2表达情况进行了检测,以期为皮肤淋巴瘤的早期诊断和治疗提供参考指标。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1材料来源收集武汉大学人民医院病理科2006年～2009年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40例,其中22例蕈样肉芽肿(MF)、7例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6例其他类型的T细胞淋巴瘤、5例B细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。　　1.1.2材料分

4、组将所有标本进行常规HE染色,将实验分为2组:皮肤淋巴瘤组和皮肤炎症病变组。　　1.2方法　　1.2.1常规脱水、透明、石蜡包埋、切片及HE染色　　1.2.2免疫组织化学SP法检测Cdk2相关抗原8　　具体步骤：①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景

5、;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为Cdk

6、2的阳性对照组。　　1.2.3免疫组织化学结果判断　　Cdk2以细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对Cdk2的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×8400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。　　1.3统计学处理　　数据以均数

7、±标准差表示，用SPSS12.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。　　2结果　　皮肤炎症病变组:皮肤炎症病变内可见少量的棕黄色颗粒,Cdk2表达弱或无表达;皮肤淋巴瘤组:皮肤淋巴瘤内可见密集分布的棕黄色颗粒，Cdk2表达强。图像分析结果显示：皮肤炎症病变组Cdk2表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.0458±0.0015和0.0297±0.0019;皮肤淋巴瘤组Cdk2表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.7831±0.0069和0.7436±0.0060。皮肤炎症病变组与皮肤淋