胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究

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1、北京理工大学珠海学院实验论文实验论文胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究学院：化工与材料学院专业：姓名：班级：生物工程学号：指导老师：中国·珠海二○一六年四月3北京理工大学珠海学院实验论文诚信承诺书本人郑重承诺：本人承诺呈交的毕业设计《胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究》是在指导教师的指导下，独立开展研究取得的成果，文中引用他人的观点和材料，均在文后按顺序列出其参考文献，设计使用的数据真实可靠。本人签名：日期：年月日3北京理工大学珠海学院实验论文胰蛋白酶的分离纯化及动力学研究摘要本实验通过用有机溶剂沉淀法和离心法提取胰蛋白酶的专一性抑制剂-鸡卵类粘蛋白（CHOM）作为亲和配基，运用了

2、Bradford法定量测定蛋白质浓度再利用亲和层析法对胰蛋白酶进行分离纯化，然后通过用抑制剂对酶反应速度的影响来了解酶促反应，掌握其规律，为了最大限度地实现酶促反应的高效率、寻找最有利的反应条件以及了解酶在代谢中的作用和某些药物的作用机理等，都需要掌握酶促反应速度的规律。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行酶纯度检验以及其相对分子量的测定。关键词：胰蛋白酶；鸡卵粘蛋白；亲和层析法；米氏常数；酶促反应动力；聚丙烯酰胺凝胶电泳V北京理工大学珠海学院实验论文TrypsinofisolationandpurificationanddynamicresearchAbstract　　This

3、experimentthroughwithorganicsolventprecipitationmethodandcentrifugalmethodextractiontrypsinofspecificsexinhibitors-chickeneggsclassstickprotein(CHOM)asAffinitydistributionbase,usinghasBradfordmethodquantitativedeterminationproteinconcentrationagainusingaffinitychromatographymethodontrypsin

4、forseparationpurification,thenthroughwithinhibitorsonenzymereactionspeedofeffecttounderstandenzymepromotingreaction,masteritslaw,tomaximumtoachievedenzymepromotingreactionofefficient,andTofindthemostfavorableconditionsandtheroleoftheenzymeinthemetabolicmechanismandeffectofcertaindrugs,need

5、stomasterthelawofspeedofenzymaticreactions.Finally,polyacrylamidegelelectrophoresisofenzymepuritytestandthedeterminationofitsmolecularweight.Keywords:trypsin;eggprotein;affinitychromatography;-Mentenconstant;enzymaticreactionforce;PolyacrylamidegelelectrophoresisV北京理工大学珠海学院实验论文目录摘要IAbstrac

6、tII目录III1前言11.1研究背景11.2胰蛋白酶简要介绍11.3蛋白分离纯化方法综述11.3.1沉淀法11.3.1.1盐析法11.3.1.2有机溶剂沉淀法21.3.1.3蛋白质沉淀剂21.3.1.4聚乙二醇沉淀作用21.3.1.5选择性沉淀法21.3.2吸附层析21.3.2.1吸附柱层析21.3.2.2薄层层析21.3.2.3聚酰胺薄膜层析21.3.3离子交换层析31.3.4凝胶过滤31.3.5亲和层析3V北京理工大学珠海学院实验论文1.3.6聚焦层析41.3.7气相色谱41.3.8高效液相色谱41.4胰蛋白酶研究进展42实验原理52.1胰蛋白酶的亲和配基-鸡卵粘蛋白

7、的分离与定量52.1.1蛋白质沉淀52.1.1.1盐析52.1.2蛋白质定量52.2亲和层析法分离纯化胰蛋白酶52.2.1亲和层析法的各项要素52.2.2亲和层析法介绍62.2.3胰蛋白酶活性测定62.3酶动力学研究72.3.1米氏方程72.3.2抑制动力学72.4聚丙烯酰氨凝胶电泳82.4.1PAGE凝胶的组成82.4.2电泳的浓缩作用82.4.3PAGE染色及干燥83实验材料（设备）93.1实验材料93.1.1实验原料93.1.2实验原料来源93.1.3凝胶配置93.1.3.1Disc-PAGE/SDS-PAG