饲料中氨基酸的测定

《饲料中氨基酸的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、饲料中氨基酸的测定黎观红江西农业大学动物科技学院6饲料中氨基酸的测定(教材P106)氨基酸是组成蛋白质的基本结构单位，也是蛋白质的分解产物；蛋白质营养——氨基酸营养（不是很确切，小肽营养）；理想蛋白或理想氨基酸模式（畜禽日粮的氨基酸平衡理论）——饲料蛋白质营养价值评定。6.1概述6饲料中氨基酸的测定氨基酸的分析测定饲料级氨基酸添加剂（单体制剂含量或纯度测定）饲料原料和配合饲料氨基酸含量的测定（蛋白质形式存在的、游离氨基酸含量）通过酸水解、氧化酸水解和碱水解等处理方法将结合态氨基酸变成游离氨基酸离子交换树脂、HPLC测定简单的化学分析6饲料中氨基酸的

2、测定6.2氨基酸饲料添加剂质量标准与检验饲料中氨基酸的测定(教材P120-131)6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换层析法）氨基酸自动分析仪：主要由日本（Hitachi日立系列产品）、美国（贝克曼（Beckman）公司）、英国（安玛西亚公司）、德国（安米诺西斯公司）等国家生产。氨基酸测定专用仪器，准确度高，设备昂贵。日立L－8800氨基酸自动分析仪L-8900氨基酸自动分析仪的内部结构饲料中氨基酸的测定6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理饲料中氨基酸的测定6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理氨基酸的分离（离子

3、交换树脂分离）：A、离子交换层析（IonExchangeChromatography）基本原理以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。饲料中氨基酸的测定A、离子交换层析基本原理离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团）和反离子组成。基质一般是不溶性聚合物，如树脂，纤维素，葡聚糖，醇脂糖等；纤维素－O—CH2—COO-—Na＋基质电荷基团反离子树脂－N+(CH3)—OH-RA+B＋RB＋A+(RA是阳离子交换剂，B为溶液中的离子或待分离的生物分子）A、离子交换层析基本原理当

4、[A+]=[B+],[RB]>[RA],说明R－与B＋的结合力比A＋大；反之亦然。对于两性蛋白而言，结合力取决于其等电点以及溶液的pH值。饲料中氨基酸的测定1.平衡阶段:离子交换剂与反离子结合。2.吸附阶段：样品与反离子进行交换。3、4.解吸附阶段：用梯度缓冲液洗脱，先洗下弱吸附物质，后洗下强吸附物质。5.再生阶段：用原始平衡液进行充分洗涤，即可重复使用。12345原始缓冲溶液的反离子样品溶液中的离子梯度液中的离子饲料中氨基酸的测定A、离子交换层析基本原理Ion-exchangechromatography（一）测定原理B、氨基酸的分离（离子交换树

5、脂分离）氨基酸：两性电解质，不同氨基酸电离常数各不相同。pH、pI氨基酸的pI从2.77（天门冬氨酸）到10.76（精氨酸）不等。大多在5～6之间。谷氨酸：3.22；组氨酸：7.59；赖氨酸：9.74。氨基酸的等电点不同氨基酸对树脂的亲和力不同，其强弱顺序为：碱性氨基酸>芳香族氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸及羟基氨基酸。6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）阴离子两性离子阳离子（pH>pI）（pH=pI）（pH

6、吸附、解吸附，由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小）吸附强度有差异。不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸>芳香族氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸及羟基氨基酸。提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱上洗脱下来。洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺序一定，标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中各种氨基酸的含量。（一）测定原理B、氨基酸的洗脱饲料中氨基酸的测定6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）测定原理

7、B、氨基酸的洗脱用pH递增的柠檬酸盐缓冲溶液洗脱侧链pKa增大的氨基酸分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高温反应器中进行衍生反应，生成可以被分光光度计检测的有色物质，然后在检测器中被检测出来。C、氨基酸与茚三酮反应茚三酮反应饲料中氨基酸的测定6.3氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）（一）蛋白质的水解A、盐酸水解（常规或直接水解法）适用范围：饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中除色氨酸、含硫氨基酸以外的15种氨基酸的准确测定。（为什么是15种？）样品加入6mol/L的HCl溶液，真空封口，在110℃下水解22～24h，冷却后定容、过滤、蒸干。上机测定。此过程中

8、，色氨酸全部被破坏，含硫氨基酸被部分氧化损失，大约损失20～30％。加入巯基乙醇可部分保护蛋氨酸，提高测值10％～20％天