反相高效液相色谱法分析注射用盐酸洛美沙星

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1、反相高效液相色谱法分析注射用盐酸洛美沙星【摘要】为了建立反相高效液相色谱法测定注射用盐酸洛美沙星中盐酸洛美沙星含量的方法，采用phenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为0.025mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.5)-乙腈-(82：18)，柱温30℃，检测波长287nm，流速为1.0mL/min。盐酸洛美沙星及其有关物质可完全分离；进样20μL时，线性浓度范围为5～215μg/mL；最低检测限(LOD)为12ng/mL(S/N=3)，最低定量限(LOQ)为60ng/mL(S/N=10)；日内精密度(RSD)为0.85%

2、(n=5)，日间精密度(RSD)为1.35%(n=5)。该方法简便、快速，专属性强，可用于对注射用盐酸洛美沙星的含量测定。【关键词】反相高效液相色谱法；洛美沙星；有关物质注射用盐酸洛美沙星是第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药，临床用于治疗敏感细菌引起的呼吸道、泌尿生殖系统、胃肠道、皮肤软组织等感染，其半衰期长，疗效确切得到临床的广泛应用。其含量测定有紫外可见分光光度法［1］、HPLC法［2-4］等。紫外可见分光光度法专属性差，HPLC法有的主峰拖尾，有的各有关物质间分离差。本文建立的HPLC分析方法专属性强，主峰与相邻杂质达完全分离，各有关物质间分离符合药典要求，

3、此法适用于注射用盐酸洛美沙星含量的测定。8　　1仪器与试药Agilent-1100型高效液相色谱仪：泵G1311A，检测器G1314A，1100型色谱工作站。AE240电子天平，METTLER公司生产。洛美沙星对照品(批号：0452-200001，含量：90.0%，中国药品生物制品检定所)。注射用盐酸洛美沙星样品：批号20040408-2，050609，050316(市售)。三乙胺、磷酸、盐酸均为分析纯；水为超纯水；乙腈为色谱纯。　　2实验方法与结果　　2.1检测波长的选择取盐酸洛美沙星对照品适量，用流动相溶解定容的溶液在220～380nm的波长范围内扫描

4、，在287nm波长处有最大吸收，选择287nm作为检测波长。　　2.2色谱条件色谱柱：phenomenexC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为0.025mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.5)-乙腈-(82：18)，柱温30℃，检测波长287nm，流速为1.0mL/min，进样20μ8L。此色谱条件下洛美沙星峰的理论板数为6000，色谱图见图1。　　2.3专属性试验　　2.3.160℃放置　　取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约100μg/mL)于60℃恒温水浴6h，进样测定。　　2.3.2UV光照　　取用流动相溶解稀释的洛美沙星对

5、照品溶液(约100μg/mL)于UV光照6h(溶液由无色变为棕黄色)，进样测定。　　2.3.3氧化破坏　　取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加30%过氧化氢5滴，室温放置20min，用流动相定容，摇匀进样测定。　　2.3.4酸破坏8　　取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加1mol/L盐酸2mL，室温放置40min，用流动相定容，摇匀进样测定。　　2.3.5碱破坏　　取用流动相溶解稀释的洛美沙星对照品溶液(约1000μg/mL)1mL到10mL量瓶中，加1

6、mol/L氢氧化钠2mL，室温放置40min，用流动相定容，摇匀进样测定。　　2.3.6混合溶液　　照药典方法分别溶解稀释依诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星和环丙沙星各对照品，分别取上述各对照品溶液适量置于同一量瓶中，再加洛美沙星对照品溶液，用流动相定容，摇匀，制成含各对照品分别约50μg/mL的溶液，进样测定。高温、光照、氧化、酸、碱加速降解和混合溶液色谱图(图2)显示各降解杂质和具有同一母核结构的各化合物均不干扰洛美沙星的测定。　　2.4线性关系考察8精密称取洛美沙星对照品适量，用流动相溶解定容制成约1mg/mL的对照品储备液，取此储备液适量用流动

7、相分别稀释得到5.0、10、20、50、100、150、215μg/mL的7个不同浓度的溶液，进样测定峰面积。峰面积(A)与浓度(C)的线性回归方程为：A=119.25×C+242.42(r=0.9991，n=7)，表明在此浓度范围内洛美沙星与峰面积线性关系良好。在选定的色谱条件下，最低检测限(LOD)为12ng/mL(S/N=3)，最低定量限(LOQ)为60ng/mL(S/N=10)。　　2.5精密度试验精密称取注射用盐酸洛美沙星样品数份，分别流动相溶解定容至约25μg/mL的溶液，分别进样测定，以峰面积/供试品浓度之比值表征精密度。日内精密度RSD为0

8、.85%(n=5)，日间精密度RSD为1.35%(n=5)。　　2