半夏蛋白抗肿瘤活性组分的提取分离

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1、半夏蛋白抗肿瘤活性组分的提取分离作者：付芸,黄必胜,李娟,田代志,陈科力【摘要】目的分离半夏蛋白的抗肿瘤活性组分,研究该半夏蛋白组分的抗肿瘤作用。方法用凝胶柱分离纯化半夏粗总蛋白,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)观察半夏蛋白对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制,应用流式细胞术(FCM)检测其对细胞凋亡的影响。结果半夏粗总蛋白中30%硫酸铵沉淀部分、60%硫酸铵沉淀部分对肿瘤抑制的量效关系不明显,30%硫酸铵沉淀部分经分离后0.05mol/L和0.1mol/LNaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel

2、-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异。30%硫酸铵沉淀蛋白有促进Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白中30%硫酸铵沉淀部分对Bel-7402细胞生长具有明显抑制作用及促进Bel-7402细胞凋亡的作用。【关键词】半夏；Bel-7402细胞；抗肿瘤蛋白组分；抗肿瘤活性测定Abstract：ObjectiveToisolatetheanti-tumorproteingroupsfromPinelliaternatarhizomeandinvestigatetheanti-tumorac

3、tivityoftheseproteingroupsonBel-7402cell.MethodsThetotalrawproteinwasisolatedwithsepharosecolumnchromatography.Methyl-thiazolyl-tetrazolinm(MTT)wasusedto8analyzetheeffectofPinelliaternataProteinoninhibitinggrowthoftumorcells.Apoptosiswasdetectedbyflowcy

4、tometry(FCM).ResultsThe30%and60%(NH4)2SO4depositionpartoftotalproteinsfromPinelliaternatarhizomehavenocertainrelationshipbetweenquantityandinhibitoryaction,butproteinpeak3elutedwith0.05mol/Lor0.1mol/LNaClfrom30%(NH4)2SO4depositionpartshowedaeffectofconc

5、entrationdepending.FCManalysisshowedthattheproteinof30%(NH4)2SO4depositionpartcouldinduceapoptosis.ConclusionThe30%(NH4)2SO4depositionpartoftotalproteinsfromPinelliaternatarhizomecouldsignificantlyinhibitBel-7402growthandinduceitsapoptosis.Keywords：Pine

6、lliaternata；Bel-7402；anti-tumorproteingroups；assayofanti-tumoractivity　　半夏为天南星科植物半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit.的块茎,含有生物碱[1]、有机酸[2]、半夏蛋白[3]和多种氨基酸[4]等成分。本实验从鲜品半夏中分离得到一组活性蛋白组分,并对其体外抗肿瘤活性强度进行了测定,从而为有效成分的进一步纯化和作用机制的研究奠定基础。8　　1材料和方法　　1.1药物半夏新鲜药材样品现场采自湖北京山,经笔

7、者鉴定为天南星科半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit.的新鲜块茎。　　1.2试剂与仪器RPMI1640(GIBCO公司)；胎牛血清、新生牛血清(三利生物制品厂)；DMSO、胰蛋白酶、氯霉素、青霉素、EDTA(Amresco公司)；MTT、PI(Sigma公司)；其它化学试剂均为分析纯。DEAESepharoseFF(AmershamBiosciences)；DHL-A电脑恒流泵、DBS-100型电脑全自动部分收集器、HD-3紫外检测仪(上海沪西分析仪器厂)；752N型紫外可见分

8、光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；TGL-16G-A型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；SW-CJ-1F型无菌操作台(苏州净化设备厂)；FACSCalibur型流式细胞仪(BD公司)；SUNRISE酶标仪(tecan)；SHELLRBCO2恒温细胞培养箱(Sheldon)；CK2-TRC-3倒置显微镜(Olympus)。　　1.3细胞培养8Bel-7402细胞由武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)提供,采用常规培养,培养液为含有10%新生