包头市肥胖儿童的apoe基因多态性研究

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1、包头市肥胖儿童的ApoE基因多态性研究作者：张利芳程子英王惠琴邢少姬【摘要】目的：研究包头市肥胖儿童ApoE基因多态性。方法：从白细胞中提取基因组DNA，设计引物扩增ApoE基因，用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析其多态性。结果：本实验共检出4种ApoE基因型，分别是E3/3、E2/3、E3/4、E2/4，未检出E2/2、E4/4型;肥胖组与对照组等位基因ε2、ε3、ε4频率分布不均,ε3发生频率最高;与健康组儿童比较,肥胖组儿童ε4等位基因发生频率增高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：ApoE基因多态性与儿童肥胖有一定

2、关系。【关键词】肥胖儿童;ApoE基因;多态性　人类载脂蛋白E(ApoE)基因位于19号染色体，具有明显的基因遗传多态性。ApoE有3种主要的异构体，即E2、E3、E4，它们分别由一个基因位点的3个等位基因ε2、ε3、ε64编码。ApoE是血清中主要载脂蛋白之一，参与机体脂质代谢及调节胆固醇平衡[1]。ApoE三种异构体与受体的亲和力不同而影响脂代谢，从而不同程度地影响血脂水平。高血脂可以引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肥胖等慢性疾病，具有潜在危险。本文研究了我市部分肥胖儿童的ApoE基因多态性，为下一步探讨肥胖儿童ApoE基因多态性及与血脂关系的研究提供基础材料

3、。　　1材料与方法　　1.1主要试剂　　HhaⅠ酶(美国BioLabs公司),pBR322DNA/MspImarker(北京TIANGENBIOTECH公司),PCR扩增试剂(大连宝生物公司)。　　1.2研究对象　　根据《中国学龄儿童青少年BMI超重、肥胖筛查分类标准》选择本市两所中学肥胖儿童60名，其中男42名，女18名，年龄12～14岁，平均年龄13.2岁;对照组健康儿童60名，其中男38名，女22名，年龄12～14岁，平均年龄13.3岁。两组对象均为汉族。　　1.3采血及白细胞DNA基因组提取方法　　受检者空腹12～14h，消毒后于肘静脉取血1mL注入EDTA

4、抗凝管储存。白细胞DNA基因组提取采用常规酚-氯仿抽提法。　　1.4PCR引物设计[2]P1：5′-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC-3′;P2：5′-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3′6;由上海生工生物工程技术公司合成。　　1.5ApoE基因PCR扩增　　预变性94℃2min，变性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸5min。以琼脂糖电泳鉴定。　　1.6HhaⅠ酶切　　扩增产物20μL用10U内切酶HhaⅠ,进行酶切。　　1.7酶切产物电泳　　12%聚丙烯酰胺凝胶电泳，25mA3～

5、4h，EB染色，紫外下观察条带。E2/2基因型为91、81bp,E2/3型为91、81、48bp，E3/3为91、48bp，E3/4为91、72、48bp，E2/4为91、81、72、48bp，E4/4为72、48bp。　　1.8统计学分析　　数据应用SPSS11.5软件进行分析，分类资料用频数表示,分类资料组间比较用χ2检验。6　　2结果　　2.1PCR产物电泳　　扩增出预期244bp大小ApoE基因片段，见图1。图1PCR扩增产物电泳结果2.2PCR产物酶切电泳HhaⅠ酶切PCR产物电泳结果共显示4种基因型，分别为E3/3：91、48bp;E2/3型：91、81

6、、48bp;E3/4：91、72、48bp;E2/4：91、81、72、48bp。未发现E2/2和E4/4基因型，见图2。图2ApoE基因HhaⅠ酶切电泳结果　　2.3ApoE基因频率　　肥胖组与对照组等位基因频率分布不均,以ε3最常见。与对照组比较,肥胖组儿童基因含E4的杂合子(E3/4+E2/4)明显增高(25.0%),而对照组为8.3%,两组比较发现,肥胖组儿童ε4等位基因频率增高(χ2=4.42，P<0.05)。详见表1。　　3讨论6　　近年来，ApoE基因已经成为研究肥胖病的热点，ApoE基因在调节血脂和脂蛋白代谢方面有着非常重要的作用，被认为是肥胖

7、的重要候选基因[3]。大量研究表明，ApoE基因多态性影响血脂浓度，与高血脂、动脉粥样硬化、冠心病、肥胖等密切相关。儿童肥胖已经成为世界公共问题，肥胖与遗传有关，目前认为ApoE基因有可能是儿童血脂水平异常的遗传标志，研究儿童ApoE基因多态性能为解决儿童肥胖和高血脂问题提供基础资料。表1肥胖儿童组与健康儿童组ApoE基因型及等位基因频率本实验共检出4种ApoE基因型，分别是E3/3、E2/3、E3/4、E2/4，未检出E2/2、E4/4型。肥胖组与对照组基因组成不同，等位基因ε2、ε3、ε4频率分布不均,以ε3发生频率最高，ε2、ε4等位基因发生频率低，与国外