健脑口服液对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织sod、mda和ache活性的影响

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健脑口服液对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织SOD、MDA和AchE活性的影响作者：王金萍王占庆曾明徐娟刘玉萍【摘要】目的观察健脑口服液对双侧颈总动脉结扎致痴呆大鼠学习记忆能力及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乙酰胆碱酯酶(AchE)含量的影响。方法大鼠双侧颈总动脉反复夹闭再灌注同时腹腔注射硝普钠降压法建立血管痴呆(VD)大鼠模型，考察痴呆大鼠在水迷宫中学习、记忆成绩，测定脑组织SOD、MDA和AchE活性。结果与假手术组比较，痴呆模型组大鼠记忆成绩明显下降(P<0.01)，脑组织SOD含量下降(P<0.01)，MDA、AchE含量增加(P<0.05);与痴呆模型组大鼠比较，健脑口服液中、高剂量组学习记忆成绩明显上升，脑组织SOD含量升高，MDA、AchE含量下降(P<0.01)。结论健脑口服液升高VD大鼠脑组织SOD和AchE含量，降低MDA活性，增强VD大鼠学习记忆能力。【关键词】健脑口服液;血管性痴呆;学习记忆能力;乙酰胆碱酯酶;超氧化物歧化酶;丙二醛7 血管性痴呆(VD)是指缺血性脑血管疾病引起脑功能障碍，以进行性智力减退为特征的中枢神经系统退行性疾病，其典型症状是记忆损伤。VD既增加了社会负担，又对中老年人的生活质量和健康构成严重威胁。健脑口服液是应用多年的中药复方制剂，临床用于VD病人的治疗。本实验以大鼠VD模型，从行为学和自由基变化两个方面进行健脑口服液对抗VD的探讨，为临床应用提供实验依据。　　1资料与方法　　1.1受试药品健脑口服液由本单位自制，由益智、鹿角胶、黄芪、熟地等按10∶3∶15∶15组成，采用水煎醇沉工艺制备。用时以蒸馏水将健脑口服液配制成每毫升含生药量0.081、0.162、0.324g的溶液。　　1.2仪器与试剂紫外分光光度计(日本岛津);大鼠水迷宫(中国医学科学院药物研究所);MR1812离心机(美国Jouan);DY89Ⅰ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝科研仪器厂)。SOD和MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。　　1.3受试动物Wistar大鼠，雌雄各半，由中国医学科学院动物繁殖场提供，合格证号：SCXK(京)20050013。　　1.4造模与分组大鼠按体重随机分为7组，即正常组、假手术组、模型组、健脑口服液低、中、高剂量组(0.25、0.50、1.00g/kg)和阳性药尼莫地平组(0.787 g/kg)。参考文献〔1，2〕方法用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注同时腹腔注射硝普钠降压法建立VD大鼠模型。将实验大鼠用10%的水合氯醛(4ml/kg)腹腔注射麻醉后，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧颈总动脉(CCA)。模型组、健脑口服液三个剂量组及尼莫地平组在夹闭双侧CCA之前，腹腔注射浓度为0.05%的硝普钠(5ml/kg)，随即用无创动脉夹夹闭双侧CCA，10min后，再通10min，再夹闭10min，再通后，伤口洒青霉素粉适量，缝合伤口，放回笼中室温(25±0.5)℃饲养，假手术组的麻醉及手术过程与模型组相同，但不阻断CCA，不注射硝普钠，正常组不作任何处理。从手术前3d开始，灌胃给药，每天1次，灌胃体积为1.0ml/100g，直到手术后14d。　　1.5水迷宫实验〔3，4〕用一长1.1m、宽为0.7m、高为0.4m的毛玻璃槽，槽的一端有阶梯，动物可顺其爬上，槽内为迷宫状，多处有盲端，只有一条可达到阶梯，实验时槽内充水，水深30cm，用恒温水浴控制水温(25±2)℃，动物不能看到阶梯，造模14d后进行训练，训练前，先将大鼠放在梯子附近使其自行爬上2次，之后分3阶段进行训练。第1阶段：用挡板在离梯子附近的A处拦住，使大鼠从A处开始训练;第2阶段：用挡板在槽中间B处，由此开始训练;第3阶段：从离梯子较远的C处开始训练。每一阶段学习训练两次，休息5min后再进行下一阶段训练，全部训练结束后使大鼠休息57 min，再将其放于爬梯附近使其自行爬上2次，然后直接将其放于C处，记录大鼠游完全程到达爬梯的时间(记为潜伏期)和进入盲端的次数(记为错误次数)，5min不能游出者按5min计，以此作为学习成绩，24h后重复测试，作为记忆成绩。将学习成绩和对应的记忆成绩均测定3次，取稳定后的第3次的成绩进行统计分析。　　1.6SOD和MDA测定〔5〕取结束水迷宫实验的大鼠，断颈处死后取脑，电子天平称量0.5g，加生理盐水5.0ml，匀浆，4000r/min离心10min，取上清，按试剂盒说明书操作。　　1.7统计学方法计量资料以x±s表示，统计软件为SPSS11.5，组间比较采用单因素方差分析。　　2结果　　2.1各组大鼠记忆功能比较健脑口服液丸对双侧颈总动脉结扎大鼠水迷宫实验结果见表1，健脑口服液使VD大鼠水迷宫中的潜伏期缩短，错误次数减少，与模型组比较，具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。表1健脑口服液对VD大鼠水迷宫的结果表2健脑口服液对VD大鼠生化指标的影响　　2.2健脑口服液对VD大鼠生化指标的影响如见表2所示，与模型组比较，健脑口服液三个剂量组均具有显著性差异(P<0.05)，显示出具有降低MDA及升高SOD和AchE的作用。　　3讨论7 　　65岁以上脑卒中患者中,约25%～41%的患者在3个月内发展为VD〔6〕,属老年人常见病和多发病。VD患者由于大脑缺血缺氧，引起智力和记忆力进行性衰退，学习记忆障碍是VD普遍而严重的表现。本研究用水迷宫实验中，学习和记忆的错误次数，模型组大鼠明显高于对照组和假手术组，而潜伏期模型组大鼠明显小于对照组和假手术组，模型组大鼠学习记忆能力下降，说明造模成功。健脑口服液明显减少大鼠在水迷宫中学习和记忆的错误次数，缩短潜伏期，具有提高VD大鼠学习和记忆能力。　　乙酰胆碱(Ach)是中枢胆碱能系统与学习记忆有关的重要递质，进行和维持高级神经系统功能，它由胆碱乙酰转移酶(ChAT)合成，胆碱酯酶(AchE)分解，通过Ach受体发挥生物学效应。VD病人大脑皮层和海马中，ChAT和AchE的活性明显下降，显示了痴呆与胆碱能系统功能紊乱密切相关〔7〕。本药通过抑制AchE的活性,从而减少Ach的水解,可能也是中药治疗VD的作用机制之一。7 　　体内氧自由基过量，引起组织过氧化损伤，是VD的重要因素之一。清除自由基可防止组织过氧化损伤，延缓痴呆病情的恶化〔8〕。MDA是脂类过氧化生成物，MDA水平的高低反应机体受自由基损伤的程度。SOD具有清除超氧阴离子自由基、抑制脂质过氧化的作用，提高体内SOD含量，可以保护细胞免受自由基的伤害。本实验模型组MDA含量明显高于给药组，模型组SOD含量明显低于给药组量，表明健脑口服液胶囊可明显提高痴呆模型大鼠SOD活力，具有明显的抗氧化能力。【参考文献】　1石海燕,李莹,史佳琳,等.地黄寡糖对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马乙酰胆碱的影响〔J〕.中药药理与临床，2008;24(2)：279.　　2潘朝旺，刘娥，罗磊.六味银杏胶囊对血管痴呆型大鼠一氧化氮合酶的影响〔J〕.河南中医学院学报，2009;24(143)：268.　　3李斌，刘汇波，郭德玉，等.双侧颈总动脉结扎大鼠行为学观察〔J〕.中国实验动物学杂志，2000;10(1)：158.　　4张荔,潘志远,金毅，等.人参皂苷Rg2对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响〔J〕.中国临床药理学与治疗学，2008;13(3)：27682.　　5李长生，王荣霞，李军，等.首乌益智灵对血管性痴呆模型大鼠脑组织SOD活性、MDA含量的影响〔J〕.中国老年学杂志，2007;27(9)：17635.7 　　6PaulRH，CohenRA，MoserDJ,etal.Clinicalcorrelatesofcognitivedeclineinvasculardementia〔J〕.CognBehavNeurol,2003;16(1):406.　　7盛树力.老年痴呆从分子生物学到临床诊治〔M〕.北京:科学技术文献出版社,1999：93124　　8徐青，孙强三，王晓红，等.升黄益智方对痴呆模型小鼠脑组织SOD活性的影响〔J〕.中国老年学杂志，2007;27(8)：7345.7