红细胞计数和血红蛋白测定

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1、红细胞计数和血红蛋白测定概述：血液由血浆和血细胞两部分组成。通过循环系统与全身各个组织器官密切联系参与机体各项生理功能活动，维持机体正常新陈代谢和内环境平衡。在病理情况下，血液系统疾病除直接累及血液外，也可以影响全身组织器官，而各组织器官的病变也可直接或间接地引起学液发生变化，临床上较多的检验项目是通过血液标本的检验来了解机体的变化。血常规检查（BloodRoutineExamination）红细胞计数（RBC）·血红蛋白测定（Hb）白细胞计数（WBC）白细胞分类计数（DifferentialCount，DC）血常规检查对各系统

2、疾病的诊断和鉴别可以提供许多重要信息，是临床医学检验中最常用，最重要的基本内容。红细胞计数与Hb测定名称缩写英文全称红细胞计数RbcRedBloodCell血红蛋白测定HbHemoglobin一、红细胞基础理论（一）RBC来源、生成、寿命及衰亡红细胞系祖细胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各发育阶段骨髓造血干细胞骨髓原红细胞（CFU-S）促红细胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）网织红细胞成熟红细胞从骨髓益出至外周血的全过程约需5天时间一个原红细胞最终可生成8~16个成熟红细胞红细胞的生存时间为

3、120天珠蛋白参与再造血衰亡的RBC铁胆红素，参与胆红素代谢（二）RBC的生理机能（见课件）（三）Hb的组成及结构珠蛋白（含两对肽链）血红蛋白（Hb）亚铁血红素（Fe+4个卟啉）α2β2（成人主要Hb，简称HbA占90%）α链（141AA）珠蛋白组合形式α2δ2（成人次要β链（146AA）Hb，HbA2占1~3%）α2γ2（胎儿主要Hb，HbF占2%以下）二、红细胞计数（一）原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数（用已校准的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀释液内混匀），滴入血细胞计数盘内，然后于显微镜下

4、计数一定范围内的RBC数，经过换算即可求得每升血液中的红细胞数。（二）试剂枸橼酸钠（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸馏水100ml此配方克服了传统的Hayem液的缺点。（三）操作见课件（四）参考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150新生儿：6.0~7.0170~200（五）临床意义升高：相对升高——与脱水有关（吐、泻、汗、尿、灼、癌）绝对升高——与乏氧有关生理性（高原、胎儿、新生儿、运动、精神因素）病理性（心肺疾患、真性红

5、细胞增多症）降低：生理性降低——妊娠、婴幼儿、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障碍、丢失增多（失血）、破坏增多（溶血）由于各种病因导致周围血红细胞减少，即病理性贫血其贫血的病因学分类见第9页“表2-1”三、血红蛋白测定（一）血红蛋白测定方法改良沙利（Sahli）氏法托尔克维斯脱（Tallgvist）氏法光电比色法硫酸铜溶液比重法酸化（碱化）光电比色法氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）测定法碱羟高铁血红素（AHD-575）法上机分析（二）氰化高铁血红蛋白（HiCN）法原理：血红蛋白

6、被高铁氰化钾[K3Fe（CN）6]氧化成高铁血红蛋白（Hi）再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋（hemigl-obinCyanide，简称HiCN）。氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高精度分光光度计进行直接定量测定。或用HiCN参考液进行比色测定。而幻灯片12试剂：常用的Hb转化液为文齐氏液（见实习指导）静置操作：血液20ul+转化液5ml———比色5分钟计算：64458Hb（g/L）=测定吸光度（A）×————×25144×1000=A×367.764458是目前国际公认的血红蛋白平均分子

7、量44是1965年国际血液学标准化委员会（ICSH）公布的血红蛋白摩尔吸光度。251是稀释倍数（三）注意事项：必须以HiCN法为标准，绘制标准曲线HiCN试剂不能贮存于塑料瓶中，应放40C冰箱不能图工作方便不顾质量管理要求遇到白细胞数过多或异常球蛋白增高的血标本，HiCN比色液会出现浑浊，可离心取上清夜或向比色液中加少许NaCL（约0.25g）或碳酸钾（0.1g）氰化钾是剧毒品，应妥善保管，配试剂时要按剧毒品管理程序操作若用分光光度计作精度定量测定，分光光度计的波长和吸光度需校正，带宽应小于1nm，比色杯光径1.00cm，允许误

8、差为0.5%（0.995~1.005cm），测定温度200C~250C。HiCN参考液的标准（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504应在1.59~1.63之间（3）A750＜0.002（4）棕色容器保存，稳定期长，40C下至少