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时间:2019-10-14
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1、实验五一、红细胞显微镜计数二、血红蛋白测定一、红细胞计数红细胞计数指测定单位体积血液中红细胞的数量。显微镜计数法血细胞分析仪法(三)红细胞计数方法红细胞计数指测定单位体积血液中红细胞的数量。显微镜计数法(本节主要学习)血细胞分析仪法1.红细胞显微镜计数法用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数后,滴入计数板,在显微镜下计数一定范围内红细胞数,经换算可求得每升血液中的红细胞数。红细胞稀释液Hayem液枸橼酸钠稀释液普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水①Hayem液主要成分及作用:NaCl调节渗透压;Na2SO4调节渗透压,提高比重防止细胞粘连;HgCl2防腐;蒸馏
2、水缺点:遇高球蛋白血症患者,由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。②枸橼酸钠稀释液主要成分及作用:NaCl调节渗透压;枸橼酸钠调节渗透压,抗凝;甲醛防腐;蒸馏水优点:配制简单,可使红细胞在稀释后较长时间保持正常形态并且不凝集,故应用较广。③普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水急时用。参考值红细胞数(×1012/L)成年男性4.0~5.5成年女性3.5~5.0新生儿6.0~7.0白细胞的影响一般情况下,实际影响较小,可忽略不计;白细胞过高者(WBC>100×109/L),应校正。实际红细胞数=RBC-WBC;高倍镜下注意识别,计数时勿将白细胞计入。二、血红蛋白测定
3、血红蛋白组成4条珠蛋白肽链4个亚铁血红素分子按不带氧计算,血红蛋白分子量为64458。亚铁血红素无种属特异性;由Fe2+和原卟啉组成;铁原子位于卟啉环中央,具有6条配位键;其中4条与原卟啉中心的4个吡咯环氮原子连接;另2条配位键与血红素分子平面垂直,分别与平面两侧的配体(1个珠蛋白肽链,1个O2)连接。血红蛋白及其衍生物氧合Hb(Hb02):呈鲜红色;还原Hb(Hbred):呈暗红色;碳氧Hb(HbCO):呈樱桃红色;高铁Hb(Hi):呈红褐色;氰化高铁Hb(HiCN):呈棕红色,540nm处有一较宽吸收峰。血红蛋白测定方法及评价血红蛋白测定,即测定血液
4、中各种血红蛋白的总浓度。氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白(SLS-Hb)测定法碱羟血红蛋白(AHD575)测定法叠氮血红蛋白(HiN3)测定法溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法血细胞分析仪法(三)血红蛋白测定方法及评价血红蛋白测定,即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白(SLS-Hb)测定法碱羟血红蛋白(AHD575)测定法叠氮血红蛋白(HiN3)测定法溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法血细胞分析仪法目前常用方法氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法⑴
5、原理血液在血红蛋白转化液中溶血后,除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi),Hi再与试剂中CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN)。HiCN在540nm处有一吸收峰。根据标本的吸光度,即可求得血红蛋白的浓度。转化液1983年全国临床检验方法学学术会议推荐采用文齐氏液。组成及作用:K3Fe(CN)6氧化作用KCN提供CN-离子KH2PO4缓冲液非离子表面活性剂破坏红细胞,防止混浊特点pH7.2±0.2,Hb转化快,5min即可完成,非离子表面活性剂可防止试剂混浊。⑶计算公式Hb(g/L)=A44×100064458×2
6、51=A×367.7A为测定管吸光度44为毫摩尔消光系数64458/1000为1mmol/LHb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数⑷优缺点优点ICSH和WHO推荐的参考方法;操作简便、结果稳定可靠;除SHb外其它Hb衍生物均可检测;读取吸光度后可直接定值。缺点试剂中含剧毒药氰化钾;不能测定SHb,对HbCO转化较慢;遇高球蛋白或高白细胞血症试剂易混浊。废液处理水1:1稀释废液敞口放置15h以上CN-氧化成CO2、N2挥发CN-水解成CO32-、NH4+排入下水道加入次氯酸钠35ml/L参考区间成年男性120~160g/L成年女性110~150g/L新生儿
7、170~200g/L临床意义RBC和Hb增多成年男性RBC>6.0×1012/L,Hb>170g/L成年女性RBC>5.5×1012/L,Hb>160g/LRBC和Hb减少红细胞和血红蛋白低于参考值的下限,为红细胞和血红蛋白减少,通常称贫血。作业红细胞计数时如遇WBC过高,应如何校正?血红蛋白测定的原理、步骤、参考值、临床意义及注意事项?
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