人脐血间充质干细胞抑制异体t淋巴细胞反应的实验及临床意义

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1、人脐血间充质干细胞抑制异体T淋巴细胞反应的实验及临床意义作者：王茜，杨琨，白海，吴涛，路继红【摘要】　　目的：研究人脐血间充质干细胞(MSCs)对异体外周血T淋巴细胞抑制的影响.方法：分离、扩增脐血MSCs，流式细胞术检测表面标志以鉴定.取分离培养的脐血MSCs，与经分离的异体淋巴细胞共培养，在植物血凝素（PHA）刺激下，用MTT还原法测定细胞增殖，观察脐血MSCs对PHA刺激的T淋巴细胞转化抑制作用.采用ELISA检测培养上清中IFNγ和IL4的分泌水平.结果：脐血MSCs在PHA刺激下可抑制T淋巴细胞增殖，且其培养上清也

2、具有抑制异体淋巴细胞增殖转化能力.ELISA检测7d共培养上清中IFNγ和IL4两种细胞因子的含量，发现IFNγ分泌水平下调、IL4分泌水平部分上调.结论：脐血MSCs具有抑制异体淋巴细胞免疫反应，降低移植物抗宿主反应（GVHD）的作用.具有研究价值和应用潜能.【关键词】胎血/细胞学;间质干细胞；外周血T淋巴细胞；植物血凝素类；干扰素Ⅱ型；白细胞介素4　　【Abstract】AIM:Tostudytheeffectsofhumanumbilicalcordbloodderivedmesenchymalstemcells

3、(MSCs)onperipheralbloodTlymphocytes.METHODS:MSCswereisolatedfromnormalhumanumbilicalcordblood,culturedinvitro,purifiedandthenidentifiedbyexaminingsurfacemarkerwithFCM.10LymphocyteswereisolatedfromallogenicperipheralbloodandidentifiedwithFCM.TheMSCsandlymphocyteswerec

4、oculturedin96wellplatesfor72h.TlymphocyteproliferationwasmeasuredbyusingMTTreductionmethodandtheeffectofMSCsontheTlymphocytetransformationstimulatedbyPHAwasobserved.Onday7ofcoculture,theculturesupernatantwascollectedtodetecttheexpressionsofIFNγandIL4withELISA.RE

5、SULTS:HumanumbilicalcordbloodderivedMSCsinhibitedTlymphocyteproliferationandPHAinducedlymphocytetransformation.ThesecretionofIFNγinsupernatantwassignificantlydownregulated,whiletheexpressionofIL4waspartiallyincreased.CONCLUSION:HumanumbilicalcordbloodderivedMS

6、CscaninhibittheimmuneresponseofallogenicTlymphocytesandalleviatethegrafeversushostdiseases.　　【Keywords】fetalblood/cytology;mesenchymalstemcells;peripheralbloodTlymphocytes;phytohemagglutinins;interferonTypeⅡ;interleukin4;　　0引言　　间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)成为目前

7、倍受关注的一类多能干细胞.10人脐血中除含有丰富的造血干细胞，还存在一类不同于造血干细胞的原始细胞，在合适的条件下可以向成骨细胞和脂肪细胞分化，甚至跨系向神经元细胞分化［1］，表现出较强的多向分化潜能.脐血MSCs可从脐血、胎盘、羊水、脐静脉内皮下层、外周等组织中分离［2-3］，与骨髓MSCs相比，脐血MSCs具有来源丰富、取材方便、移植排斥反应轻微和外源性污染少等优点，因而具有更大的研究价值和应用潜能.MSCs除具有支持体外造血、促进体内造血重建功能外，还具有抑制同种异体免疫反应，降低移植物抗宿主反应的作用.体内实验表明，器官

8、移植时输注MSCs可减轻排斥反应和延长移植物生存时间.我们试图通过研究人脐血MSCs对异体外周血T淋巴细胞的影响，进一步探讨MSCs的免疫调控机制，为脐血MSCs的应用提供实验依据.　　1　材料和方法　　1.1　材料　　RPMI1640培养基(华美公司)；淋巴