两种荧光方法分析血样中锌原卟啉和原卟啉

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1、两种荧光方法分析血样中锌原卟啉和原卟啉作者：黄维　李元娜刘倩吴海龙李耀群【摘要】利用N,N二甲基甲酰胺同时萃取血样中痕量的锌原卟啉和原卟啉，以三维荧光交替三线性分解算法和导数恒基体同步荧光法同时分析血样中的锌原卟啉和原卟啉。前者中锌原卟啉和原卟啉分别在0.6～35μg/L和0.4～27μg/L范围内呈良好的线性，检出限分别为0.18和0.12μg/L;后者中锌原卟啉和原卟啉在0.14～45μg/L和0.056～28.5μg/L范围内呈良好的线性，检出限分别为0.12和0.045μg/L。实际血

2、样中两种方法的平均回收率分别为(82±9)%和(85±10)%，且两种方法测定20份血样时获得的相关性良好。【关键词】卟啉，导数恒基体同步荧光法，三维荧光交替三线性分解算法,血样　1引言11　　常规的荧光光谱法灵敏度较高，然而多组分分析时往往存在光谱干扰。近年来，为了提高荧光法的选择性，研究人员一方面发展了同步荧光光谱法，该法具有简化谱图、减少光散射、提高选择性等特点，适合于多组分混合物的分析，如Lin等[1]建立了粪样中原卟啉和粪卟啉的导数恒基体同步荧光分析技术;另一方面引入化学计量学(如交替

3、三线性分解二阶校正荧光法)的方法[2]，以“数学分离”替代“化学分离”，实现复杂体系感兴趣多成分的同时定量测定。如文献[3,4]中采用三维荧光交替三线性分解算法来定量分析氨基酸口服液中的酪氨酸和色氨酸。　　卟啉是在生命机体的新陈代谢中的重要物质。当铅、砷中毒或者缺铁性贫血时，患者血液中锌原卟啉的水平明显升高[5,6];红细胞原卟啉症患者则是血液中原卟啉浓度升高[7,8]，所以测定血液中卟啉的种类和浓度可以为临床筛查和诊断提供重要依据，对铅、砷污染的环境监测也具有重要意义。目前，已建立的卟啉检测方

4、法有荧光法[9]、分光光度法[10]、高效液相色谱法[11]和色谱质谱联用法[12]等。例如Piomelli[13]和Chen[14]提出的常规的荧光光谱法，需要通过数学计算引入光谱补偿因子来校正原卟啉的荧光强度，才能同时测定血样中的锌原卟啉和原卟啉;周培琛等[15]提出了导数可变角同步荧光法分析光谱严重重叠的原卟啉和锌原卟啉。　　本研究建立了分析痕量锌原卟啉和原卟啉的两种方法：三维荧光交替三线性分解算法和导数恒基体同步荧光法，将其用于血样的测定，并比较了两种方法的测量结果。　　2实验部分11

5、　　2.1仪器与试剂　　除特别指明外，所得的荧光光谱均在实验室自制的荧光仪上绘制[15];150W氙灯作光源，光电倍增管负高压为-700V。单色器的激发和发射的光谱通带均为5nm，扫描速度为240nm/min。以VisualBasicforExcel编写程序，从激发与发射光谱数据计算得来的激发发射矩阵用于获取合适的恒基体同步荧光光谱扫描路径，同时采用电子微分系统获取导数光谱。　　三维(3D)扫描选择EM模式，激发波长为350～450nm，间隔5nm;发射波长为560～670nm，间隔5nm。扫描

6、速度为480nm/min。本实验获取的三维荧光数阵在Matlab环境下利用交替三线性分解算法(ATLD)解析[2]。　　原卟啉二钠盐(Aldrich公司)，锌原卟啉(Strem公司)，N,N二甲基甲酰胺(DMF)，均为分析纯;血样来自厦门大学医院。实验使用1cm×1cm石英比色皿，RJTGL16C型高速离心机(江苏无锡市瑞江分析仪器有限公司)。　　2.2实验方法11　　锌原卟啉(ZnPP)和原卟啉(PP)标准溶液的配制：分别准确称取1.2mg锌原卟啉和原卟啉二钠盐，用DMF稀释至50mL，得

7、到浓度分别为38.4和39.6mmol/L。避光保存于冰箱中，用时再逐级稀释至所需要浓度。　　配制一系列浓度分别为1.14,2.28,4.56,11.4,18.2,22.8和34.2μg/L锌原卟啉的DMF溶液，为实验中测定血液中锌原卟啉的校正集。在此范围内待测物的浓度与荧光强度呈线性关系。配制浓度分别为0.57,1.14,2.28,4.56,11.4,18.2和27.4μg/L原卟啉的DMF溶液，作为实验中测定血液中原卟啉的校正集。　　3结果与讨论　　3.1三维荧光交替三线性分解算法[3，4]

8、同时测定锌原卟啉和原卟啉　　采用交替三线性分解算法分解由校正样和预测样荧光数据组成的数据阵(22×21×12)，预测结果如表1。5次测定所得锌原卟啉和原卟啉的平均回收率分别是：(101±7)%和(95±10)%。根据实际血样中的卟啉浓度，建模所选的锌原卟啉和原卟啉的浓度线性范围分别为0.6～35μg/L和0.4～27μ11g/L。锌原卟啉和原卟啉工作曲线方程分别为：Y=0.0688x-0.0405和Y=0.0581x-0.0231，相关系数分别为0.996和0.998。以3倍空白标