tlr4和cd14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达

《tlr4和cd14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、TLR4和CD14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达【摘要】　　目的：探讨Toll样受体4（tolllikereceptor4，TLR4）和CD14在晶状体上皮细胞（lensepithelialcell,LEC）的表达。方法：采用一步法反转录多聚酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)检测LEC中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果：用RTPCR检测分别获得451bp和348bp的清晰扩增条带，经基因测序证实为TLR4mRNA和CD14mRNA。结论：晶状体上皮细胞可表达TLR4和CD

2、14。【关键词】Toll样受体4；CD14；表达；晶状体上皮细胞　　Abstract　AIM：Tostudytheexpressionsoftolllikereceptor4（TLR4）andCD14inlensepithelialcell(LEC).METHODS：TheexpressionsofTLR4mRNAandCD14mRNAweredetectedbyonesteppolymerasechainreaction(PCR)withreversetranscription(RTPCR)inculturedLE

3、C.RESULTS：Theamplifiedclearbandsof451bpand348bpwereobtainedrespectivelyviaRTPCR,whichwereconfirmedtobeTLR4mRNAandCD14mRNAbymeansofgenesequenceanalysis.CONCLUSION:ThereareexpressionsofTLR4andCD14inLEC.8　　KEYWORDS:Tolllikereceptor4;CD14;expression;lensepithelialc

4、ell　　0　引言　　Toll样受体（tolllikereceptor，TLR）对机体免疫特别是感染性免疫具有十分重要的意义。迄今在人细胞膜上已发现11种TLR（TLR1TLR11），其中TLR4是研究最多的一种Toll样受体蛋白。有关TLR4的研究被《ScienceWatch》杂志列为2001年十大生物科学重要进展之一[1]。TLR4能识别G外膜的主要成分脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），并介导LPS引起的炎症反应。LPS激活TLR4的信号途径需要CD14的参与，CD14能促进TLR4对LPS

5、的应答。已有研究表明，TLR4在许多细胞均有表达[2]。但至今尚不知在晶状体上皮细胞（lensepithelialcell,LEC）是否表达TLR4，也不知LEC是否表达CD14。白内障是当今世界的主要致盲性眼病，超声乳化白内障囊外摘除联合人工晶状体植入手术是目前的主要复明手段。但研究表明术后眼内发生了炎症反应[35]。白内障术中及术后炎症介质释放、补体激活、血房水屏障破坏等均刺激LEC的增殖并向后囊膜移行，促使后囊膜混浊（posteriorcapsularopacification,PCO）的发生，因此炎症反应在促进后

6、发性白内障（aftercataract）的形成中起重要作用[6]。我们采用RT8PCR法检测体外培养的LEC的TLR4mRNA和CD14mRNA表达，为探讨TLR4在白内障术后炎症反应和后发性白内障发病中的作用提供科学依据。　　1　材料和方法　　1.1　材料　　Trizol系MBI公司产品。一步法RTPCR试剂盒系日本TaKaRa公司产品。琼脂糖系西班牙Condas进口分装试剂。溴化乙锭、Tris碱、溴酚兰、蔗糖、甲醛、RNASampleLoadingBuffer（编号L003001）均购自上海博亚公司。100bpD

7、NAMarker，EDTANa2购自北京天为时代科技有限公司。胰蛋白酶、硼酸和焦碳酸二乙酯（DEPC）系美国Amresco公司产品。DMEM培养基干粉系美国Gibco公司产品。乙二胺四乙酸（EDTA）系美国Augus公司产品。引物由Invitrogen上海英骏生物技术公司合成。蛋白核酸测定仪（德国EppendorfAG22331Humburg）、PCR扩增仪（德国Eppendorf5331型）、电泳仪、凝胶成像分析系统（美国BioRad）。取健康新鲜小牛眼的晶状体前囊膜，用胰蛋白酶消化后加入DMEM培养液，放入37℃，5

8、%CO2培养箱中培养。用倒置显微镜观察原代LEC生长情况。经7～10d细胞基本融合后进行细胞传代。取第3代细胞用于以下实验。　　1.2　方法8　　收集LEC细胞，用Trizol试剂提取总RNA并鉴定，分别取TLR4和CD14样品总RNA0.5mg，总反应体积为25μL，用TaKaRa公司一步法RTPC