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1、M蛋白的鉴定及实验分析【关键词】M蛋白；免疫球蛋白；分析 IdentifyandExperimentalAnalysisofMProtein Keywords:Mprotein;Immuneglobin;AnalysisM蛋白(骨髓瘤蛋白)细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸顺序和蛋白质结构的免疫球蛋白(Ig)分子或其片段,临床上常见于多发性骨髓瘤(MM)、原发性巨球蛋白血症、重链病、原发性淀粉样变性、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症等淋巴细胞或浆细胞克隆增殖性疾病［1］。M蛋白是单克隆免疫球蛋白的缩写,也称副蛋白、骨髓瘤蛋白、M成分。对此病只有采取较好
2、实验室方法与正确实验分析相结合，才能为临床提供可靠依据。 1血清区带电泳技术是临床实验室对蛋白质进行的一种剖析技术。它可以对血清或其他体液中异常蛋白质进行筛选。它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的pH条件下主要根据其所带电荷数将其分离成各种片段。6 1.1正常人血清的区带电泳结果和扫描图像 从左至右的5个区带依次为白蛋白及α1、α2、β和γ球蛋白区。有时在慢电泳时β球蛋白可分为β1球蛋白和β2球蛋白。白蛋白区的成分包括白蛋白、前白蛋白和部分α1脂蛋白;α1区包括α1抗胰酶蛋白、α1脂蛋白、Ｇc球蛋白;α
3、2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白等;β1区包括转铁蛋白、补体Ｃ3ｃ、IgＡ、血结素等;β2区包括Ｃ3ｂ、IgＡ;γ区包括IgＧ、IgＭ、CRP等。 1.2多克隆免疫球蛋白增殖性疾病 各类Ig均增加,相应的其他区带会减少,多见于肝硬化、慢性肝炎和系统性红斑狼疮等,由于β和γ区大量增殖,导致两区之间的间隙消失,成为γβ桥,亦称γβ联,扫描时β消失,出现一高而宽的γ峰。 1.3免疫缺陷症时会出现无γ峰或低β峰。 1.4Ｍ蛋白血症 特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在γ区高与宽的比例≥2,β区则≥1(正常时小于此比例),其他区带明显减
4、少。6 1.5Ｍ蛋白量少时常被其他蛋白掩盖 可用稀释血清的方法解决,在进行血清区带电泳时,有时会出现假性Ｍ蛋白条带,此时则需要进行免疫电泳和免疫固定检测以资甄别。出现假性Ｍ蛋白条带的情况包括:当血液凝固不完全,血清中含有纤维蛋白原；血管内溶血时血清内血红蛋白结合珠蛋白含量增高;缺铁性贫血时血清转铁蛋白浓度升高；某些应急状态下α球蛋白浓度增加及先天性高脂蛋白血症;双白蛋白血症、白蛋白变异、白蛋白结合青霉素等药物后电泳行为改变。 2免疫球蛋白检测正常人产生免疫球蛋白的浆细胞是多克隆性质合成的免疫球蛋白除5种不同重链外，还只有κ和λ轻链，并且κ/λ6比
5、是恒定［2］，M蛋白疾病是骨髓中异常浆细胞极度增生所引起的一种恶性疾病,早期可无临床症状,起病缓慢,有的病例临床表现极不典型,易引起漏诊和误诊。因此血清免疫球蛋白也是M蛋白综合诊断的标准之一。Ig定量常用方法有单向(环状)免疫扩散法、速率散射浊度测定法、火箭免疫电泳法。其中以速率散射浊度测定法最为准确,且采用自动化方法使操作方便，速率散射比浊法定量检测Ig的意义在于确定Ｍ蛋白所属Ig类别及数量，速率动态散射比浊法是抗原抗体结合反应在每一个单位时间内的速度,连续测定各单位时间的反应速度即为动态观察,该法具有速度快、敏感度高、精确度高、稳定性好的优点。一般
6、M蛋白所属Ig含量均显著升高，其他类Ig则正常或显著降低。 3尿本周氏蛋白本周氏蛋白是单克隆游离免疫球蛋白轻链,它是κ或λ轻链的合成超过重链时轻链游离于血清中,分子量为45KD,容易从尿中排出本周氏蛋白,多来源于骨髓浆细胞的恶性增生,是由于合成紊乱,在生成和分泌完整的免疫球蛋白分子时的过量轻链。本周氏蛋白又称凝溶蛋白,具有特殊的热沉淀性质,在pH5.0的条件下,加热至50℃~60℃时出现沉淀,继续加热至90℃后又重新溶解,再冷却时又可出现沉淀。过去检测方法中,是利用本周氏蛋白的这种特殊的热沉淀性质检测尿本周氏蛋白的。这种方法由于存在特异性和
7、灵敏度差的缺点,其结果也受诸多因素的影响:例如沉淀变化需要肉眼观察,由于操作过程中人为影响因素较多,敏感度较低,常导致判断有误差;尿液混浊、尿液中含有过多的其他蛋白以及实验过程中受温度变化等可影响其结果。本实验可以看出,热沉淀反应法应不再作为本周氏蛋白的筛选。同时也不能确定轻链的型别。 4免疫固定6免疫固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作用于蛋白,进行抗原抗体反应,使抗原在电泳位置上被固定。免疫固定后的区带,应为单一免疫复合物沉淀带,根据抗血清的不同,可判定未知蛋白为何种成分。在研究Ｍ蛋白时,免疫固定电泳至少要应用6种抗血清,一是抗全血清抗体
8、,其他5种分别为γ、α、μ、κ和λ的抗血清。免疫固定电泳不只对ＭＭ分型有意义,同时还可对ＭＭ患
