m蛋白检测与鉴定

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1、M蛋白的检测与鉴定　一、M蛋白的基础知识M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（轻链、重链等）。由于它产生于单一克隆（monoclone），又常出现于多发性骨髓瘤（multiplemyeloma）、巨球蛋白血症（macroglobulinemia）、恶性淋巴瘤（malignantlymphoma）病人的血或尿中，故称M蛋白。这些M蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白（paraprotein）。M蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M蛋白血症多见于

2、多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIgM病（Solomen－Konkel病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C端基因缺陷）等。意义不明的M蛋白血症（monoclonalgammopathyofundeterminedsignificance，MGUS）又分为两种，一种是与其他恶性肿瘤（如恶性淋巴瘤）伴发者，另一种即所谓良性M蛋白血症。M蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。二、M蛋白的鉴定1．多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M蛋白检测和鉴定（1）血清总蛋白定量。90％的患者血清总蛋白含量升高（70％的患者＞10

3、0g／L），约10％的患者正常或甚至偏低（如轻链病时）。（2）血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。M蛋白在电泳时出现典型的单株峰（亦称M区带），特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在γ区高比宽≥2，在β区≥1。此M区带可因Ig的不同而出现在在γ～α2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少，显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高，这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。（3）血清Ig定量。一般M蛋白所属Ig含量均显著增高，其他类Ig则正常或显著减低。（4）

4、免疫电泳。①正常人血清免疫电泳结果：可分辨出20多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为IgM，依次为IgA、IgG，三者成平滑的连续沉淀线。②多发骨髓瘤：多发性骨髓瘤分IgG、IgA、IgM、IgI）和IgE5种，IgG和IgA又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢γ～β2区皆可出现。IgG1多出现在慢γ区，IgG4在β～α2区。M蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。由于此种病人血清中Ig含量甚高，免疫扩散时可出现抗原绝对过

5、剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可获得满意结果。③巨球蛋白血症：由于IgM分子大量增殖所致。在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。正常情况下，IgM形成短小沉淀线，不易看到变形。当IgM大量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移，这多是IgM分子聚合，电泳不移动所致。（5）尿本－周蛋白检测。①定性检测：用热沉淀法和磺基水杨酸法。②免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。本法60％～80％的骨髓瘤病人和几乎全部轻链

6、病病人可检出尿本周蛋白。③轻链白蛋白－戊二醛交联免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。本法尿本周蛋白检出率为100％，假阳性4％，尿中含有200μg／ml时即可出现阳性结果。2．重链病时M蛋白检测与鉴定与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由于重链分子较Ig分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（β～α）。但重链病一般需选择免疫电泳证实。3．7SIgM病时M蛋白的检测与鉴定一般IgM为五聚体，沉降系数为19S，而7SIgM患者的IgM为单体，沉降系数为7S。证明7SIgM有两种方法：一种是在测定IgM总量后，将被测血清1～2ml过Sephar

7、ose6B柱，再根据洗脱峰图用面积仪测出7SIgM占总IgM的百分比，与IgM总量换算即得7SIgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。此法原理是五聚体IgM可与PHA结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA，后进行电泳，五聚体IgM被PHA所阻留，而7SIgM继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的IgM抗血清反应，形成单一沉淀弧。4．半分子病时M蛋白检测与鉴定所谓半分子病（half－molecule）是指此种M蛋白由一条重键和一条轻链组成，分子量是正常Ig分子的1／2或＜1／2（因半分子病肽链往往有部分缺失）