《生化工程》实验教学大纲

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1、《生化工程》实验教学大纲一、课程的性质与任务《生化工程实验技术》为生物技术、生物工程专业一门重要的专业课，通过该课程的学习加深对理论课程的理解，培养学生学习兴趣，提高综合素质。实验内容应以培养学生动手操作能力、提高分析能力和解决实际问题的能力为目的，在实验安排上以研究性和综合性内容为主，贴近实际生产，注重先进性。二、实验的目的与基本要求实验课的目的在于加深对生化工程基础理论、基本知识的理解，掌握较为通用的实验设计和操作技能，提高学生分析问题和解决问题的能力，培养学生操作技能、实验技巧、科研能力，训练学生创新能力、研发能力等综合专业素质。实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，并

2、及时记录。要善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，研究实验中的问题。三、实验考核方式及办法考核方式考查，以实验报告质量结合课堂操作评定等级，分优、良、中、及格和不及格五等。四、实验项目一览表生化工程实验项目一览表序实验项目实验实验适用学号名称类型要求专业时1菠萝蛋白酶的制备及活性测定验证性必做生物工程、生物技术42pH和温度对酶活力的影响综合性必做生物工程、生物技术43植物体内的转氨基作用综合性必做生物工程、生物技术44绿豆芽中酸性磷酸脂酶的提取及固定化综合性必做生物工程、生物技术45银杏黄酮组分的薄层色谱鉴定综合性必做生物工程、生物技术46越菊花色素树脂法分离纯化及测定综合性必

3、做生物工程、生物技术47黄柏盐酸小檗碱的提取、分离及综合性必做生物工程、生物技术8定性、定量检测8SOD酶的制备与化学修饰（实验设计）设计性必做生物工程、生物技术8五、实验项目的具体内容：实验一菠萝蛋白酶的制备及活性测定实验1．本次实验的目的和要求：系统地学习菠萝蛋白酶粗酶液的制备方法，熟练掌握蛋白酶活性检测实验技术。2．实验内容或原理：将菠萝的组织细胞破碎成匀浆，促使酶从细胞内释放，用缓冲液萃取，即得粗酶液。酪蛋白是一种蛋白质，它被菠萝蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275nm处有吸收峰，根据测定275nm处的吸收值，可以判定菠萝蛋白酶的酶活力。吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸

4、收值大说明酪氨酸含量高，也就是说菠萝蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。3．需用的仪器或试剂等：电力搅拌器；离心机4000~1000rpm；754紫外分光光度计；酪蛋白；半胱氨酸；三氯乙酸等。4．实验步骤：（1）粗酶提取；（2）酶促反应；（3）酶活测定。5．教学方式：学生以个人为单位进行实际操作。6．考核要求：以操作的规范性和实验结果评分。7．实验报告要求：按小论文要求写实验报告。实验二pH和温度对酶活力的影响1．本次实验的目的和要求：考察pH和温度对酶活力的影响；通过pH或温度~酶活力曲线得制作，求出酸性磷酸脂酶的最适pH和温度。2．实验内容或原理：本实验通过配置一系列不同pH值的缓冲试

5、剂，再将酶加入各缓冲试剂中，以维持一定的pH值，再分别加入底物β-甘油磷酸钠，酶使β-甘油磷酸钠催化水解成β—甘油和磷酸氢根离子，反应一定时间后，加入10%三氯乙酸终止反应。再加入定磷试剂，磷酸氢根离子与定磷试剂反应生成钼蓝，产生的钼蓝在660nm处有最大吸收，吸光度的大小在一定范围内与无机磷酸含量成正比，因此可用光密度O.D值代替酶活性，作出O.D~pH曲线，从曲线上可知表现其最高活力时所处的最适pH值。在不同温度的条件下，发生酶促反应，反应一定时间后，加入10%三氯乙酸终止反应。再加入定磷试剂，磷酸氢根离子与定磷试剂反应生成钼蓝，产生的钼蓝在660nm处有最大吸收，吸光度的大小在一

6、定范围内与无机磷酸含量成正比，因此可用光密度O.D值代替酶活性，作出O.D~温度曲线，从曲线上可知表现其最高活力时所处的最适温度。3．需用的仪器或试剂等：恒温水浴槽；秒表；721型分光温度计；冷冻离心机；研缸；冰箱；冰盘；活性炭；β-甘油磷酸钠等。4．实验步骤：（1）粗酶提取；（2）酶促反应；（3）酶活测定；（4）求出最适pH。5．教学方式：学生以个人为单位进行实际操作。6．考核要求：以操作的规范性和实验结果评分。7．实验报告要求：按小论文要求写实验报告。实验三植物体内的转氨基作用实验1．本次实验的目的和要求：学习转氨基作用的原理；学习用纸层析法测定转氨基作用。2．实验内容或原理：通过

7、转氨基酶的作用，α—氨基酸上的氨基可能转移到α-酮酸的α—酮基的位置上，结果形成一种新的α—酮酸和一种新的α—氨基酸。所发生的反应和生成的氨基酸可用纸上层析法检出。3．需用的仪器或试剂等：恒温箱；离心机；吹风机；丙氨酸；谷氨酸；α—酮戊二酸；茚三酮；酚等。4．实验步骤：（1）粗酶提取；（2）酶促反应；（3）层析。5．教学方式：学生以个人为单位进行实际操作。6．考核要求：以操作的规范性和实验结果评分。7．实验报告要求：按小论文要求写实验报告。实验