黄芪提取液的化学实验研究

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1、黄芪提取液的化学实验研究　　【内容摘要】通过印迹聚合物制备大孔树脂柱色谱对黄芪提取液的选择性吸附与分离实验，并利用38%、41%、43%乙醇梯度洗脱，并且采用高效液相色谱法检测黄酮有效成分浓度，实验表面该分子印迹聚合物对黄芪提取液中刺芒柄花素具有很好的选择识别能力。　　【关键词】黄芪化学实验聚合程度分析结果与分析　　一、实验试剂　　（1）刺芒柄花素：分析纯；　　（2）甲基丙烯酸（MAA）：分析纯，天津市大茂化学试剂厂；　　（3）偶氮二异丁腈（AIBN）：分析纯，天津市大茂化学试剂厂；　　（4）乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）：分析纯；　　（5）

2、无水乙醇：分析纯，上海市国药集团化学试剂有限公司；　　（6）95%乙醇：分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司；　　（7）色谱甲醇：天津市恒兴化学试剂制造有限公司；　　（8）黄芪饮片，河北康派中药材有限公司　　二、实验仪器　　Agilent1200型高效液相色谱仪，美国安捷伦有限公司；　　UV1600型紫外可见分光光度计，北京瑞利分析仪器厂；　　WQF-310傅立叶变换红外光谱仪，北京第二光学仪器厂；　　DHG-924385-Ⅲ型电热恒温鼓风干燥箱，上海市新苗医疗器械制造有限公司；　　SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；　　

3、84-1磁力搅拌控温电热套，山东省鄄城新科教学仪器厂；　　HH-4数显恒温水浴锅，上海浦东物理光学仪器厂；　　RE-52AA旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；　　SB25-12DT型高频数控超声波清洗器，宁波新芝生物科技股份有限公司；　　FB223自动内校电子分析天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；　　FW-4A型压片机，天津光学仪器厂；　　索式提取器　　全自动比表面积和孔径分析仪，美国康塔公司QuadrasorbSI　　三、实验方法　　1.印迹聚合物的制备　　称取0.268g（1mmol）刺芒柄花素溶于7mL无水乙醇中，加入0.68mL（8mm

4、ol）甲基丙烯酸（MAA），搅拌三小时后，加入3.77mL（20mmol）乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）和60mg偶氮二异丁腈（AIBN），超声活化10min，再通N2脱氧5min，抽真空密封后放入恒温水浴锅中，60℃下反应至无溶剂生成聚合物。然后将聚合物置于烘箱中60℃干燥，干燥后研磨称重，用95%乙醇洗涤模板分子和未聚合的功能单体和交联剂，洗脱后置于烘箱60℃下干燥，得到以MAA为功能单体的刺芒柄花素分子印迹聚合物F-MIPs。同时做空白实验。　　2.紫外吸收光谱测定萃取过程　　每隔三小时取溶液进行紫外吸收光谱分析，直到最终乙醇中刺芒柄花

5、素含量不再变化为止。　　3.黄芪提取液的制备　　称取90g黄芪饮片，用粉碎机研成粉末，用720mL70%乙醇溶液浸泡半小时后，在一定温度下（90℃）回流2h，过滤，收集滤液。滤渣用540mL70%乙醇溶液水浴浸取1h后，过滤，收集滤液，合并两次滤液，减压回收乙醇，加520mL水，超声溶解，过滤，得黄芪提取液。　　4.印迹聚合物对黄芪提取液的选择性吸附与分离　　将黄芪提取液通过聚合物柱色谱方法进行选择性吸附与分离。即用150mL黄芪提取液以1mL/min的速度通过印迹聚合物（F-MIPs）色谱柱，上样后以200mL水洗脱后，再用适当洗脱剂（梯度浓

6、度的乙醇溶液）洗涤并收集洗脱产物。洗脱完毕后分别取50mL洗脱液浓缩至干再溶于甲醇中，定容至10mL容量瓶，用于高效液相色谱分析，其中高效液相色谱条件：色谱柱为Vp-ODS柱（250mm×4.6mmid，5um）；流动相为甲醇-水梯度洗脱，甲醇梯度为：0-10min，1-25%，10-20min，25-50%，20-30min，50-70%，30-50min，70-90%，50-60min，90-100%；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；检测波长为280nm；进样量20μL。　　5.红外光谱分析　　将制备的聚合物萃取前、聚合物萃取后和空

7、白组聚合物及模板分子（刺芒柄花素）进行红外光谱测定，分析其结构，评价其是否聚合及聚合程度。　　6.比表面分析　　用比表面分析仪测定分子印迹化合物的比表面积以及它的孔径分布大小。　　四、结果与分析　　1.聚合程度分析　　刺芒柄花素、聚合物萃取前、聚合物萃取后和空白组聚合物的萃取前和萃取后MAA为功能单体的刺芒柄花素聚合物与以MAA为功能单体的空白聚合物相比，以MAA为功能单体的空白聚合物在1440cm-1左右没有吸收峰，这就说明1440cm-1左右的吸收峰的确是印迹分子刺芒柄花素的吸收峰而不是功能单体、交联剂等物质的吸收峰。因此也就说明以MAA为

8、功能单体的刺芒柄花素聚合物的确包裹了大量的刺芒柄花素。以MAA为功能单体的刺芒柄花素聚合物和萃取后的以MAA为功能单体的刺芒柄花素聚合物相比，萃取后的