黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌工艺优化研究.pdf

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1、第35卷第7期家畜生态学报Vo1．35NO．72014年7月ActaEcologiaeAnimalisDomasticiJul_2O14黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌工艺优化研究乔宏兴，史洪涛，张帅帅，边传周¨(1．河南牧业经济学院生物212程系，河南郑州450046；2．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450O02)[摘要]为研究黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌的工艺流程，将活化后的枯草芽孢杆菌菌液以1的比例分别接入含黄芪提取液浓度为100、90、8O、70、60、50、40、30的液体培养基中，置于37℃温箱中进行培养，分别取24h、48h、72h的培养物检测菌液数量、芽孢形成率和OD值。对

2、初筛的培养基配方选取接种量、pH、温度和摇床转速4个条件进行正交试验观察影响发酵的主要因素并进行发酵罐大量培养。结果表明：含6o黄芪提取液芽孢数量最高可达1．70×1O。，芽孢形成率99，oD值为2．961。正交试验结果优化条件为接种量10，pH9．0，温度37℃，转速250r／min，发酵罐培养结果48h即可发酵结束，芽孢数量比摇瓶培养高5倍左右。[关键词]黄芪；枯草芽孢杆菌；发酵[中图分类号]$811．6[文献标识码]A[文章编号]1005—5228(2014)07—0058—05枯草芽孢杆菌是饲料中常用的一种添加剂，具孢杆菌菌种由河南牧业经济学院生物工程系生物技有维持肠道菌群平衡、

3、调节机体免疫功能、提高生产术教研室保存；普通培养基按照常规方法进行配性能等作用_1]。黄芪是常用的一种中草药，味甘、性制_5；20L不锈钢发酵罐由镇江东方生物技术设备温，有补气升阳、固表止汗、脱毒排脓和生肌等功有限公司生产。效。]，其有效成分黄芪多糖已被证实具有提高动物1．2黄芪提取液制备生产性能，增强机体免疫力等作用l3]。传统的合生称取适量的洁净黄芪，分别加5倍量、3倍量、2元是简单的将益生菌与植物多糖组合在一起，虽然倍量水煮沸三次，每次30min，分别取留每次煮沸在临床中也起到了一定的作用，但是并没有充分发滤液，最后合并三次滤液为黄芪提取液。挥出微生物发酵的巨大潜力。黄芪多糖具有发

4、酵益1．3菌种的活化生菌的作用，同时能提高中药活性成分含量、提高药将枯草芽孢杆菌甘油冻存管菌种接入液体普通效和降低毒副作用等优点¨4]。目前研究大多采用肉汤培养基中，37。C培养24h，以19／6的量接种于固黄芪多糖发酵益生菌，黄芪中的其他有效活性成分体培养基中，置于37℃培养48h后备用。并未充分发挥作用，黄芪提取液对枯草芽孢杆菌发1．4黄芪发酵培养基的筛选酵的研究报道较少。本研究以补益类中药黄芪提取以制备的黄芪提取液为主，添加适量液体普通液与枯草芽孢杆菌之间具有生物活性协同作用为依肉汤、(NH)SO、NaOH设计8种发酵培养基(由据，进行黄芪发酵枯草芽孢杆菌的生产工艺研究，预试验得出

5、)，分别命名为1～8号培养基，黄芪提取(拟解决的关键问题)旨在通过优化发酵工艺，提高微液：液体普通肉汤按(100：0、90：10、8O：20、70：生态制剂中芽孢的数量，为大规模生产降低生产成30、6O：40、50：50、40：60、30：7O)比例混合(V：本，提高制剂的生防效果，为开展兽用中药的益生菌V)，另加入0．02g(NH4)2SO4、0．04gNaOH，各体外转化技术、中兽药的创新提供新技术和新思路。培养基调节pH为9．0。将培养的菌种以1％的量1材料与方法接种于8种发酵培养基中，37℃转摇培养72h。1．1试验材料与仪器1．5茵体浓度的测定本试验用黄芪购于郑州市晟吴大药房；

6、枯草芽菌体浓度的测定使用比浊法进行测定，在培养[收稿日期]2014—02—28，修回日期：2014—03—24[基金项目]河南省科技攻关项目(142102310034)；河南省科技成果转化项目(142201110029)[作者简介]乔宏兴(1976一)，男，河南长垣人，硕士，副教授，研究方向：动物营养免疫学。Email：zzmzqhx@163．tom*[通讯作者]边传周(1966一)，男。河南商丘人，教授，硕士，研究方向：动物营养免疫学。E—mail：chuanzhou—bian@126．com第7期乔宏兴，等：黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌工艺优化研究59过程中每隔12h分别取样，用紫外一

7、分光光度测定介绍的方法进行芽孢染色，染色后在显微镜下观察OD6值。一个视野中100个细胞中芽孢的数量，芽孢的形成1．6平板菌落计数法的测定率一100x(芽孢的数量／ioo)。对1～8号培养基培养结束后，分别取发酵液1I．8发酵条件的正交试验设计mL，稀释至101。、10～、1O倍(由预试验数据得以培养后枯草芽孢杆菌的数量为指标，选取接出)，取0。1mL的稀释液涂布于普通琼脂平板上种量、pH值、温度和摇床转速4个条件进行正交试(做两个