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《黄牛卵母细胞和早期胚胎组蛋白乙酰化转移酶1表达模式研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、黄牛卵母细胞和早期胚胎组蛋白乙酰化转移酶1表达模式研究繁臻生毽?ReproductionandPhysiology2009年翳碡5卷第15期黄牛卵母细胞和早期胚胎组蛋白乙酰化转移酶1表达模式研究刘庆友,公方强,蒋建荣,崔奎青,石德顺(广西大学动物繁殖研究所,广西南宁530005)摘要:为探讨卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中组蛋白乙酰基转移酶(HAT1)的表达规律,研究应用实时定量PCR技术,检测了广西本地黄牛卵母细胞和附植前胚胎HAT1基因的表达情况.结果表明:HATI基因在黄牛生发泡期(GV)
2、卵母细胞,第2次减数分裂中期(MII)卵母细胞,体外受精(IVF)胚胎2-4细胞,8～16细胞,桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为1.00,0.56,0.08,O.55,O.43和O.31,在孤雌激活(PA)胚胎的2~4细胞,8～16细胞,桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为0.55,0.55,O.48和O.46.HAT1在GV期相对表达量最高,在IVF胚胎中2～4细胞表达量最少(P<0.05).由此可见,HAT1基因在黄牛卵母细胞成熟和早期胚胎阶段均有表达,GV期HAT1基因的表达最高,PA胚
3、胎HAT1基因的表达较稳定.关键词:组蛋白乙酰化转移酶;卵母细胞;早期胚胎;表达模式;黄牛中图分类号:$823.3文献标识码:A文章编号:0258—7033(2009)15—0012—041997年,首例体细胞核移植(somaticcellnucleartransfer,SCNT)动物"多莉"诞生以来,SCNT小鼠,牛,山羊,猪,猫,兔,骡,马,大鼠和水牛等多种动物研究成功.然而,大多数哺乳动物SCNT胚胎移植产生活的后代几率较低2%～10%l1l,且大部分的SCNT胚胎在出生前后表现发育异常[
4、21.研究人员认为受体卵母细胞胞质对供体细胞核表观遗传重编程不充分或错误,是SCNT胚胎发育不正常的主要原因.组蛋白乙酰化和去乙酰化是表观遗传中主要的修饰方式之一,对供体核的重编程和SCNT重构胚的正常发育发挥着重要的作用.组蛋白乙酰化程度与组蛋白乙酰转移酶(his—tone—acety1transrases,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)的表达量密切相关.HAT1是第1个被发现的组蛋白乙酰基转移酶,从酵母到哺乳动物,均可检测到HAT1的存在『3_.
5、在蟾蜍未成熟的卵母细胞中,HAT1主要存在于细胞核中;随着卵母细胞的成熟,HAT1离开细胞核,在早收稿日期:2009—02—15;修回日期:2009—04—27基金项目:国家863计划项目(2007AA100505);农业部转基因重大专项(2008ZX08007—003);广西科学基金重点项目(桂科自0991007Z)作者简介:刘庆友(1976一),男,山东菏泽人,博士通讯作者.I8中耄牧袈志期胚胎发生的过程中,定位于细胞质中[41,主要作用是将乙酰基添加到新合成的组蛋白,参与染色质装配,.当哺
6、乳动物精子进入卵母细胞后,精核蛋白被卵母细胞质中的组蛋白所代替,此时组蛋白的乙酰化状态对父源基因组的重编程和胚胎的早期发育至关重要,而HA丌基因的表达直接决定了组蛋白的乙酰化程度.因此,研究牛卵母细胞成熟过程和早期胚胎HATI相对表达规律,对阐明HAT1基因在早期胚胎发育中的作用及核重编程的机理具有重要意义1材料与方法1.1试剂和仪器培养所用试剂除TCM一199购白Gibco公司外,其余均购自Sigma公司.洗卵液和胚胎培养液(CM)是以TCM一199为基础液配制,体外成熟培养液(M)为TCM一
7、199中添加26.2mmol/LNaHCO3,5mmol/LHepes,0.1p~g/mL促卵泡素(FSH)和5%发情牛血清,所有的培养液均添加60mg/L青霉素和100mg/L链霉素,用1mol/L的NaOH溶液将pH调至7.4,并用孔径0.22m的微孔滤膜过滤消毒.OligodT18,dNTPmix,rTaqDNA聚合酶,pMD18一Tvector,PrimeScript逆转录酶试剂盒,SYBRPremixEx均购于Takara宝生物工程(大连)有限公司;2009年第45拳第15期总RNA提
8、取试剂盒购自TIANGEN公司;E.coliDH5ot感受态细胞为本室自制.罗氏LightCycler2.0荧光定量PCR仪;高速冷冻离心机(Eppendoff5810R);核酸蛋白分析仪(BeckmanDU一800).1.2材料来源从屠宰场取回黄牛卵巢后,用注射器从卵巢中抽取2~6mm卵泡,成熟培养过程见文献I7..将10～20枚成熟卵母细胞(MⅡ)放入已制备好的受精液(Tyrode'液)滴(24L)中,然后每滴注入2～5已经体外诱发获能的精子(浓度约1X106个/mL的解冻精液),并置于CO
