幼龄兔卵母细胞ivf及其早期胚胎有关基因表达研究

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1、本研究由江苏省高校自然科学研究重大项目资助(项目编号：13KJA230001)张光景：幼龄兔卵母细胞IVF及有关基因在其早期胚胎mRNA的表达幼龄兔卵母细胞IⅦ及其早期胚胎有关基因表达研究111111IlllIHIIIIIIIIII／illIllIIIIIIIIIIll研究生：张光景Y2632359导师：李拥军教授(扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州，225009)中文摘要幼畜体外胚胎生产和移植技术(juvenileinvitroembryotransfer,JIVET)是一项集幼畜超数排卵、卵母细胞体

2、外成熟、体外受精、胚胎体外培养及胚胎移植为一体的技术。JⅣET技术能够大大地缩短家畜繁殖的世代间隔，充分发掘优良母畜的繁殖潜能，提高畜群的遗传改良速度与生产效率，为家畜育种提供丰富的遗传资源。体外受精技术是JⅣET技术的一个重要环节，通过提高体外受精培养效果，能显著提高后期胚胎的生长及发育质量，有效地提高JⅣET技术的生产效率。本研究以新西兰幼龄兔为主要研究对象，经幼龄兔超数排卵和卵母细胞体外成熟，对体外培养成熟的卵母细胞进行体外受精。在受精培养体系中添加不同浓度EGCG(0、5、10、15、20、25“

3、M)，以研究抗氧化剂EGCG对精子获能及幼龄兔卵母细胞受精的影响，并且与受精液添加相同浓度EGCG的成年兔体外受精效果进行对比研究，旨在建立一种高效的培养体系，改善幼龄兔卵母细胞体外受精培养效果。并运用实时荧光定量技术对OCT-4、GDF．9、Bcl．2基因在幼龄兔及成年兔体外受精生产胚胎中的相对表达量进行研究，从分子水平研究这两类早期胚胎的基因表达差异，为提高幼龄兔胚胎后期发育质量提供理论基础。本次研究结果如下：1、在精子获能液中添加浓度为0、5、10、15、20、251．tMEGCG，获能培养后，加入

4、孕酮诱导获能精子发生顶体反应，而后采用考马斯亮蓝染色法进行观察分析，其结果表明获能液中添加不同浓度EGCG对精子获能效果具有显著的影响(尸<0．05)，其中获能液中添加10“MEGCG浓度的精子获能效果显著高于其他各组(P<0．05)。2、在受精液中添加浓度为0、5、lO、15、201．tMEGCG，对幼龄兔及成年兔受精率进行统计分析，其结果表明不同浓度的EGCG对幼龄兔及成年兔卵母细胞体外受精均具有显著性的影响(尸

5、G时，其受精率显著高于0I．tM(尸<0．05)，成年兔受精液中添加浓度为5I．tM、101．tM、15p,MEGCG时，其受精率显著高于0和20I．tM(尸O．05)。3、采用实时荧光定量技术对幼龄兔及成年兔早期胚胎中OCT-4、GDF．9、Bcl．2基因表达进行相对定量分析，其结果表明，幼龄兔胚胎中OCT-4、GDF一9基因相对表达量显著低于成年兔基因表达量(尸<0．05)，而Bel

6、．2基因相对表达量虽然低于成年兔胚胎相对表达量，但两者差异不显著(尸>O．05)。关键词：幼龄兔；卵母细胞；EGCG；体外受精；基因张光景：幼龄兔卵母细胞IVF及有关基因在其早期胚胎mRNA的表达JuvenileRabbits’OocytesIⅥ'andtheExpressionofRelatedGeneintheEarlyEmbryoM．S．candidate：OuangjingZhangAdvisor：Prof．YongjunLi(CollegeofAnimalScienceandTechnology

7、,YangzhouUniversity,225009)ABSTRACTJuvenileinvitroembryotransfer(JIVET)isatechniquewhichcombinesjuvenilesuperovalation，invitromaturation，invitrofertilization，invitrocultureandembryothransfer．Itisgreatlyshorteningthelivestockbreedinggenerationinterval，expl

8、oitingtheexcellentdams’breedingpotential，improvingthespeedandefficiencyofgeneticimprovement,andprovidingarichgeneticresourceforlivestockbreeding．InvitrofertilizationisanimportantpartofJWET．nCansignificantlyimproveth