感受态细胞制作和转化效率的研究

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1、天津农学院毕业论文中文题目:感受态细胞制作和转化效率的研究英文题目:EstablishmentofCompetentCellsandAnalysisofTransformationEfficiency学生姓名于晓猛系别动物科学系专业班级2010级动物医学专升本班指导教师李吉霞成绩评定2012年6月目录1前言12材料与方法22.1材料与仪器22.1.1菌种及质粒22.1.2培养基22.1.3仪器设备22.2方法22.2.1制备感受态细菌22.2.2DNA重组子的转化感受态大肠杆菌32.2.3质粒DNA提取53结果83.1感受态细菌转化效率观察83.

2、2质粒提取结果观察104讨论114.1DNA重组受体系统114.2感受态细胞的制备114.3质粒转化效率12参考文献13致谢14附录1：外文文献原文15附录2：外文文献原文译文20摘要质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞是分子克隆的关键步骤，是基因克隆以及DNA文库构建等研究中频繁使用的一项重要的常规操作。本研究通过复苏和扩增DH5α细菌，每50ml菌液用10ml预冷的0.1mol/L的CaCl2重悬，冰浴30min。于4℃，离心回收。每50ml初始培养物用2ml用冰浴的0.1mol/L的CaCl2重悬，100ul/份，-4℃放置24h。转化流程为：1

3、00ul感受态DH-5α+5ulPCI-Neo-hTERT冰上放置30min，42℃,热激90s，冰浴2min，加入400ulLB培养基，于37℃,50r/min振摇45min，之后取200ul涂布于含Amp琼脂板，37℃倒置培养12~16h。次日观察，并随机选择阳性克隆，用LB液体培养基进行扩增，然后按照质粒提取试剂盒操作说明提取质粒，检测转化效率。结果表明，通过上述方案可以得到活力较好的感受态细菌，经质粒转化后，效率较高，可以应用于载体的转化。关键词：感受态细胞：质粒：转化ABSTRACTItisakeystepforPlasmidtrans

4、formedintoEscherichiacolicellsinthemolecularcloning.TheimportantroutineoperationsarefrequentlyusedinthestudyofgenecloningandDNAlibraryconstruction.Inthisstudy,recoveryandamplificationofDH5αbacteria,per50mlbacteriumfluidwith10mlprecooling0.1mol/LofCaCl2resuspendedice-bath30min

5、.In4℃,centrifugalrecovery.Initialcultureofeach50mlicebath0.1mol/LCaCl2resuspendedwith2ml.100ul/part,Thetransformationflowsareasfollows:Firstly,theoperatorputsthe100ulcompetentofDH-5αand5ulPCI-Neo-hTERTontheicefor30minutes,keepsthetemperatureat42degrees,heatsitfor90secondsandi

6、ce-bathesitfor2minutes,thenadds400ulLBcultureandshakesoutitatthespeedof50roundsperminutefor45minutesatthetemperatureof37degrees.Secondly,theoperatortakesout200ulontheagarplatewithAmp,thenconvertsandculturesitfor12to16hoursatthetemperatureof37degrees.Thennextday,theoperatorobs

7、ervesit,choosesthepositivecloningatrandomandusestheLBliquidculturetoexpendit.ThentheoperatorextractstheplasmidaccordingtotheinstructionofthePlasmidExtractionKitanddetectsthetransformationefficiency.Itturnedoutthatnotonlybyusingabovemethodswecangetmanymoredynamiccompetentcells

8、,butalsoshowsahigherefficiencywhichwouldappliedtovectorconversion.Ke