培养基适用性 sop

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1、文件名称培养基适用性检查标准操作规程文件编码SOP-QC-1015-03页数共页颁发部门GMP办公室QA年月日修订年月日批准年月日审核年月日生效日期年月日分发部门质管部起草说明新增文件，直接升级为03版。目的制定培养基适用性检查标准操作规程。范围本规程适用于微生物培养基适用性测定。责任人文件起草、审核、签批、使用、归档、保管人员。执行标准《中国药典》2010版一部附录ⅩⅢ培训对象检验人员、QC主管内容1.计数培养基的适用性检查1.1适用范围细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性，成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培

2、养基均应检查。1.2菌种试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。菌种编号大肠埃希菌CMCC(B)44102金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)98003第7页共7页1.2菌液的制备试验菌株培养物的制备培养菌悬液的制备大肠埃希菌分别接种新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养上。30~35℃18~24小时分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶

3、液制备成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌接种新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上。23~28℃24~48小时黑曲霉接种新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上。23~28℃5~7天加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用滴管吸出孢子菌液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2~

4、8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用1.3适用性检查被检培养基试验菌株制备过程培养营养琼脂培养基大肠埃希菌分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu),分别注入无菌平皿中，立即注入营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固。同时，用对照培养基（营养琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。30~35℃48小时金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌第7页共7页玫瑰红钠琼脂培养基白色念珠菌分别取各试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平

5、行制备2个平皿，混匀，凝固。同时，用对照培养基（玫瑰红钠琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。23~28℃72小时黑曲霉酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基白色念珠菌取试验菌悬液1ml(50~100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固。同时，用对照培养基（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）代替被检培养基进行上述试验。23~28℃72小时1.2结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查

6、符合规定。2控制菌检查用培养基的适用性检查2.1适用范围控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。2.2菌种试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。菌种编号第7页共7页大肠埃希菌CMCC(B)44102金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)50094铜绿假单胞菌CMCC(B)10104生孢梭菌CMCC(B)64941白色念珠菌CMCC(F)98001

7、2.3菌液制备试验菌株培养物的制备培养菌悬液的制备大肠埃希菌分别接种新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养上。30~35℃18~24小时分别取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌生孢梭菌接种新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中。23~28℃18~24小时取制备好的培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。白色念珠菌接种新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上。23~28℃24~48小时取制备好的培

8、养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成含菌数为50~100cfu/ml的菌悬液。菌液制备在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2~8℃，可在24小时内使用。2.4适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项包括促生长能力、抑制能力及指示能力