SOP-ZL-QC115计数培养基适用性检查操作规程.doc

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1、东方药业1><>HgfaIIg管理规程文件编号：S0P-ZL-QC115计数培养基适用性检查操作规程版本号：00生效日期：2014.01.01文件内容：1.目的:22.适用范围：23・耳只责：24.程序：25.变更历史：5颁发部门：质量管理部分发部门：质量检验部、质量管理部起草人审核人QA审核人批准人部门质量检验部质量检验部质量管理部姓名张建平谭静吴元碧向红签名日期的：建立计数培养基适用性检查的操作规程，以保证微牛物限度检查结果准确性。2适用范围：微牛物计数的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基的适用性检3职责：1.1质量检验部微牛物检验人员对木规程起草

2、、执行负责。3.2质量检验部经理对本规程审核，培训负责。4程序4.1概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是判断的重要影响因索。4.2试验用菌株：试验菌株的传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的牛物学特性。2.2.1金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]4.2.2大肠埃希菌[CMCC(B)44102]4.2.3枯草芽泡杆菌[CMCC(B)63501]4.2.4白色念珠菌[CMCC(F)98001]4.2.5黑曲霉[CMCC(F)98003]4.3试验用培养基4.3.1菌液制备用培养基4.3.1

3、.1营养肉汤培养基4.3.1.2改良马丁培养基4.3.1.3改良马丁琼脂培养基4.3.2适用性检查培养基4.3.2.1营养琼脂培养基4.3.2.2玫瑰红钠琼脂培养基4.3.2.3酵母浸出粉月东葡萄糖琼脂培养基4.3.3试验屮培养基的对照培养基4.4试验用稀释剂4.4.10.9%无菌氯化钠溶液4.4.2含0.05%(ml/m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液4.5试验用仪器设备4.5.1恒温培养箱（30〜35°C）.霉菌培养箱（20〜25°C）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.5.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、

4、试管及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml分度0.1）4.5.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌银子、不锈钢药匙、白瓷盘。4・6操作步骤：4.6.1菌悬液的制备4.6.1.1接种大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽他杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35°C培养18〜24h,取30〜35°C培养18〜24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌营养肉汤新鲜培养物lml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每lml含菌数50〜lOOcfu的菌悬液，备用。4.6.1.2接种口色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基丄，于23〜2

5、8°C培养24〜48h,取于23〜28°C培养24〜48h的口色念珠菌新鲜培养物lml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每lml含菌数50〜lOOcfu的菌悬液备用。4.6.1.3接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜而培养基丄，于23〜28°C培养5〜7天，加入3〜5ml0.05%（ml/m1）聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将抱子洗脱，然后，用适宜的方法吸出他子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/m1）聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每lml含抱子数50〜lOOcfu的砲子悬液备用。4.6.2菌液的计数（每种菌液制

6、备2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽他杆菌的菌液lml接种至营养琼脂培养基丄，30〜35°C培养48h,口色念珠菌和黑曲霉菌lml接种至改良马丁琼脂培养基丄，23〜28°C培养72h,计数。4.6.3适用性检查4.6.3.1培养基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸岀粉月东葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。4.6.3.2营养琼脂培养基的适用性检査4.6.3.2.1取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各2皿，每皿接利

7、lml菌液（含菌50

8、〜lOOcfu）,另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30〜35°C倒置培养48h,计数；4.6.3.2.2被检培养基同法操作。4.6.3.3玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查4.6.3.3.1取5个无菌平皿，分别接种口色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接利

9、lml菌液（含菌50〜lOOcfu）,另一平皿不接种菌做空口对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于23〜28°C倒置培养72h,计数；4.6.3.3.2被检培养基同法操作。4.6.3.4酵母浸岀粉月东葡萄糖琼脂培养基的适用性检査4.6.3.4.1取3个无菌平皿,分别接种白色念

10、珠菌2皿,每皿接种lml