资源描述：
《dmem培养基制备sop》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、DMEM培养基制备SOPXB-JS-20.020.01DMEM培养基的配置1实验目的Ø配制DMEM培养基2实验原理2.1DMEM培养基的用途ØØDMEMandClick’smediahaveanosmolaritythatismorecompatiblewithmouseserumthanRPMI;infact,RPMIwasspecificallydesignedforthecultureofhumancells.2.2本实验室在培养小鼠来源细胞时选用DMEM培养基的理由Ø2.3培养基中各种组分的作用及添加依据2.3.1Hepes（羟
2、乙基哌碃乙硫磺酸,238.3）：25mM /L (5.9575g/L)，不加碳酸氢钠时pH为6.7±0.3，加碳酸氢钠时pH为7.0±0.3。单独配制时，配制为100X即0.6g/ml。Ø配制2.5M /L (0.6g/mL)Hepes：12g的Hepes定容到20mlPBS中，过滤除菌，分装为1ml/管，－20°C保存。CellBiology建议为4°C保存。ØHEPES是一种非离子缓冲液,在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用
3、,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加(不懂，何为抵消？邹强).在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.来自网络。2.3.2缓冲系统:来自网络。Ø大多数细胞所需pH在7.2-7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH(7.4-7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH(7.0-7.4).Ø由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培
4、养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L.Ø细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换.Ø大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.Ø碳酸氢钠：CO2浓度为5%时，培养液中碳酸氢钠浓度为1.97g/L；CO2浓度为10%时，培养液中碳酸氢钠浓度为3.95g/L（科学出版社.细胞实验指南P6）。DMEM的说明书上为3.7g，我们实际添加为2时，如果加入25mMHepes在5%CO2条件下，测定PH为7.11；不加Hepes时PH为
5、7.44。添加碳酸氢钠3.7g在在5%CO2条件下的PH是？？Ø（引自CellBiology）：Mostcellculturemediarequireanatmosphereof5%CO2tomaintainpH7.4.However,certainmediacontainlevelsofbicarbonatethatrequiredifferentamountsofCO2.Forexample,DMEMcontaining3700mg/literofsodiumbicarbonateequilibratesto∼pH7.6ina5%C
6、O2environmentandrequires10%CO2tomaintainpH7.4.Ø（引自IMMUNOLOGY）：HEPESbuffer(10to25mM)mustbeincludedinmediausedinshortproceduresthatarenotperformedinadefinedCO2atmosphere.HEPESmaintainsthepHofthemediaregardlessofatmosphericCO2;thus,itisoftenusedasanadditivetomediausedinCO2i
7、ncubatorssinceitrendersthepHofthemedialesssensitivetosmallfluctuationsinCO2concentration.Ø小苏打又名碳酸氢钠，为白色结晶性粉末，无臭，味微咸，在潮湿空气中即缓慢分解。易溶于水，水溶液呈弱碱性反应，水溶液放置稍久，或振荡，或加热，其碱性即增强(怀疑是生成CO2，从溶液中溢出。邹强)。在乙醇中不溶。Ø白色晶体，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在65℃以上迅速分解，在270
8、℃第7页/共7页DMEM培养基制备SOPXB-JS-20.020.01时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。溶解度：7.8g/100mL，18°C；16.0g/100mL，60°C1
