dmem细胞培养基及其改良品种

《dmem细胞培养基及其改良品种》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、DMEM细胞培养基及其改良品种DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基，各成份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。改良DMEM细胞培养基——DMEM（HED）细胞培养基DMEM（HED）细胞培养基，培养CHO细胞生产乙肝疫苗，具有较强细胞维持能力，可增加收液次数，有效提高蛋白表达率。生产和试验研究证明，DMEM（HED）细胞培养基在细胞生长和病毒分泌

2、方面均优于使用DMEM细胞培养基。a)使用DMEM（HED）细胞培养基细胞贴壁和长满单层时间明显快于传统DMEM细胞培养基，维持2个月细胞未出现脱落现象。使用DMEM（HED）细胞培养基，在接种后第2天，80％细胞已伸展并开始分裂增殖，第3天已长成较密单层，细胞贴壁均匀，形态清晰，呈多边形和梭形，细胞间略有空隙，细胞数为7.5x106个／ml。在此后转瓶培养的60d内细胞数保持稳定，无明显增加和减少，无脱落，无明显形态变化，培养液中HBsAg滴度稳定在1：128～1：512之间。而使用传统DMEM细胞培养基，只有30％和40％的细胞伸展，至第

3、4天才长成较密单层，小方瓶与双层转瓶结果相同。至30d时已长成较厚的复层，并开始大片脱落，细胞数明显减少，HBsAg滴度降低，最低降到1：32。此后细胞开始重新贴壁、增殖，至45d左右部分细胞长成单层，一部分细胞因脱落，至60d时仍未能长满转瓶。优点   DMEM细胞培养基的成分粉末型（A）粉末型（H）   粉末型(L)  配制方法 ⑴将一袋培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水将袋内残留培养基洗下,并入容器.加注射用水(水温20℃～30℃)到47.5升,轻微搅拌溶解.⑵加入185克碳酸氢钠.⑶轻微搅拌溶解,加注射用水至50升.⑷用1mol/

4、L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值.⑸用0.2μm滤膜正压过滤除菌.⑹溶液应在2℃-8℃下避光保存. 贮藏 2℃-8℃冷藏,干燥,密封,避光贮藏.