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1、马槟榔DNA提取及其RAPD反应体系的优化基因组学与应用生物学,2011年,第30卷,第1期,第117—121页GenomicsandAppliedBiology,2011,Vo1.30,No.1,117—12l技术改进UpgratedTechnology马槟榔DNA提取及其RAPD反应体系的优化于旭东张超顾文亮胡新文2郭建春1中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口,571101;2海南大学农学院,海口,570228;3海南大学园艺园林学院,儋州,571737通讯作者,jianchunguoh@163.6om
2、摘要马槟榔是我国特有的仅分布在热带,亚热带地区的珍稀濒危野生果树,马槟榔种子中所富含的植物甜蛋白马宾灵(Mabinlin)在食品甜味剂领域有着广阔的应用前景.为了对我国马槟榔野生种质资源进行遗传多样性分析,本研究建立并优化了马槟榔基因组DNA的RAPD技术最优反应体系.结果表明,采用SDS-CTAB方法提取的马槟榔基因组DNA满足RAPD试验要求;RAPD最优反应体系(25L)为:引物的终浓度为1.0ixmol/L,dNTPs的终浓度为0.2mmol/L,模板DNA的终浓度为l600ng/L,DNA聚合酶用量为4
3、0U/L.本研究通过对马槟榔DNA的提取及RAPD反应体系的优化,旨在为下一步对我国马槟榔野生种质资源进行遗传多样性分析提供基础.关键词马槟榔,RAPD,反应体系,种质ExtrationofGenomicDNAofCapparismasaikaiL6v1andOptimizationoftheRAPDReactionSystemYuXudongZhangChaoGuWenliangHuXinwenGuoJianchun1InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,C
4、hineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Haikou,571101;2CollegeofAgricultureHainanUniversity,Haikou,570228;3CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture,HainanUniversity,Danzhou,571737Correspondingauthor,jianchunguoh@163.coinDOI:10.3969/gab.030.000117Abst
5、ractCapparismasaikaiL6vlisanrareandendangeredspecieofwildfruittreewhichonlydistributesintropicalandsubtropicalregionsofChina.TheplantsweetproteinMabinlinwhichisrichintheseedsofCapparismasaikaiL6vlhasabroadapplicationprospectsinthefoodsweetenersindustry.Inorde
6、rtoanalysisthegeneticdi-versityofthewildCapparismasaikaiL6v1germplasm,thisresearchaimedtoscreenoutoptimumRAPDreactionsystemforgenomicDNAofCapparismasaikaiL6v1.TheresultsshowedthattheimprovedSDS-CTABDNAex—tractionmethodwasusedtoextractedthegenomicDNAoftheleave
7、sofCapparismasaikaiL6v1.ThesinglefactorexperimentwasadoptedtoselecttheoptimizationthedNTPsconcentration,templateDNAconcentration,Mconcentration,raqenzymeconcentrationandtheprimerconcentration.Theresultsshowsthattheoptimumreactionsystem(25IxL)forRAPDamplificat
8、ionoftheCapparismasaikaiL6vlDNAwaslistedasfollows:1.0p~mol/Lprimer,0.2mmol/LdNTPs,1600ng/LDNAand40U/Lenzyme.Alltheresultsofthisinvestigationcouldbeusedforfurtheranalysisofthespeciesdivers
