芝麻高度不育材料基因组DNA提取及RAPD反应体系的建立-论文.pdf

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1、现代农业科技2013年第23期农艺学芝麻高度不育材料基因组DNA提取及RAPD反应体系的建立赵莉-孔小卫汪强林勇翔田东丰‘(安徽省农业科学院作物研究所，安徽合肥230031；安徽大学生命科学学院)摘要以临时保持系WB51220、两用系0176A不育株、可育株0176B和皖芝1号等4份材料的叶片为研究材料，对其基因组DNA的提取及对RAPD反应体系进行优化。结果表明，改良的CTAB法获得的芝麻基因组DNA片段大小经电泳检测满足RAPD等遗传多样性分析要求；筛选出RAPD最佳反应体系：2OL反应体系含有1．5UTaqDNA聚合酶，O．25mmoL／LdNTP，2．

2、0mmoL／LM，0．75I~moL／L引物；4个不同品种的叶片基因组DNA的电泳条带之间有着明显差异。他们共有的条带为1900、l800、l000、900bp；不同的是，临时保持系WB51220比两用系0176A不育株少了1个2000bp的条带．可育株0176B比两用系0176A不育株少了1个450bp条带，皖芝1号比可育株0176B少了1个750bp和1个12oobp的条带。关键词芝麻；保持系；不育株；RAPD反应体系；建立中图分类号$565．302．4文献标识码A文章编号1007—5739(2013)23—0o21—04ExtractionofGenom

3、icDNAandOptimizationoftheRAPDReactionSy~emofSesameHighlySterileLinesZHAOLiKoNGXiao—weiWANGQiangLINYong-xiangTIANDong-feng‘(’CropResearchInstitute，AnhuiAeademyofAgricultureSciences，HereiAnhui230031；CollegeofLifeSciences，AnhuiUniversity)AbstractThegenomicDNAextractionandtheRAPD-PCRrea

4、ctionconditionswereoptimizedwhenusinggenomesfromsesameleavesoftemporarymaintainerlineWB51220，ABLineinfertileplant0176A，fertileplant0176B，andWanzhiNo．1astemplates．TheresultsindicatedthatthegenomicDNAsextractedfromsesameleavesbyimprovedCTABDNAextractionmethodsatisfiedtherequirementofg

5、eneticdiversityanalysis．ThebestreactionconditionforRAPDanalysiswasasfollows：TaqDNApolymerase1．5U，dNTP0．25mmoL／L，Mg22．0mmoL／L，andrandomprimer0．75InoI几inatotalvolumeof20L．ElectrophoresisresultsindicatedthatbandsamplifiedfromthegenomicDNAsoffourvarietieshadfourcommonbandsinlenof1900，18

6、0o，100o，and90obp，respectively．Thedifferenceswerethatnewbandsinlen~hof2O00bpand450bpwereamplifiedfromABlineinfertileplant0176AwhencomparedwithtemporarymaintainerlineWB51220andfertileplant0176B，respectively．Andtwonewbandsinlen时hof750bpand1200bpwereamplifiedfromfertileplant0176Bwhencom

7、p~edwithWanzhiNO．1．Keywordssesame；maintainerline；infertileplant；RAPDreactionsystem；optimization随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphie析。Lietalt于2001年开发出了一种新的基于PCR的SRAPDNA，RAPD)技术是由美国的Williams[1和加利福尼亚生物(sequence—relatedamplifiedpolymorphism)标记，该标记具研究所Welsht21建立在PCR(PolymeraseChainReact

8、ion)技术备RFLP、RAPD、SS