血清感染性疾病标志物筛检中应重视的若干问题

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1、血清感染性疾病标志物筛检中应重视的若干问题　李金明　　血液筛查质量的高低，直接关系到受血者的安全。目前。国内采供血机构针对感染性疾病病原体筛检的标志物共有4种，即乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型地炎病毒抗体（抗HCV）、人免疫缺陷病毒抗体（抗HIV）和梅毒抗体。主要采用酶联免疫明附试验（ELISA）方法检测。方法模式有一步双抗体夹心法、间接法和一步或两步双抗原夹心法等。所使用的仪器设备主要有酶标洗板机、全自动酶免疫分析系统和全自动加样系统等。尽管国内采血机构的血液筛查检测质量在不断提高，但在不同层次的采血机构，仍不同程度的存在一些时常困扰基层实验室工作人员的的问题

2、。　　一、 ELISA测定的“灰区”问题[1，2]　　血液筛查中的ELISA测定是一种定性测定，必须在“阳性”与“阴性”之间有一条明确的分界线，也就是所谓的“阳性判断值”（Cut-off），这是定性免疫测定结果的报告的依据，在定性免疫测定中，确定合适的阳性判断值对减少假阴性具有重要意义。而阳性判断值的上移可下移，可导致假慢性或假阴性结果的出现。通常阳性判断值，是将大量阴性和阳性的测定数据进行统计分析后确定的。其确定依据为测定的“灰区”。“灰区”的大小可用统计学方法确定。测定结果处于“灰区”的样本，可通过确认试验或追踪检测来确定到底是阳性还是阴性，这一点对于临床病人标本的检

3、测不是什么问题，但在血站筛检献血员及正常人群体检时，就必须对这个问题加以注意。对于测定吸光度值（A）低于但接近Cut-off值的血液是否可输给受血者，ELISA“灰区”到底有多太？这一点常使血站工作人员感到困惑。因此，用于血液筛查检测的ELISA试剂盒有必要确定一个“灰区“的下限。尽管这样可能会导致一些正常血液的废弃，但对于保证输血安全极有意义。　　二、“钩状效应“（Hookeffect）问题[3，4]　　“钩状效应“系指在一步法ELISA中，测定显色随着待测标本中抗析或浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度即随抗原或抗体浓度的增加而开始下降直到不显色，而出现假阴性结果

4、的问题。在免疫沉淀试验中又称为”带现象“（Zonephenomenon）。在血液筛查中，有中能因”钩状效应“的存在而出现假阴性的主要是HBsAg和抗HIV的检测。目前，国内HBsAg的检测均为一步双抗体夹心法，抗HIV有一些采用了双抗原夹心法，尽管试剂行产厂家在固相和标记抗体或抗原的选择匹配上，采取了结合位点远离或含多个可结合位点的方法，在很大程度上，可以避免或减轻“钩状效应”，但如果某一批试剂处理不好或是特定的标本，仍有可能出现由“钩状效应”所致的假阴性，解决“钩状效应”的最好办法，就量采用两步法试剂盒，其次就是对每一批试剂盒使用前，采用能得到的最强阳性的标本，进行有关

5、“钩状效应”的质检。　　三、 病毒变异的所致的假阴性问题　　病毒变异所致的假阴性主要表现在HBsAg的检测。HBV的S基因负责编码表达表面抗原，即S蛋白，任何影响S蛋白表达水平或其抗原性的突变，都可能导致表面抗原检测出现阴性结果[5-9]。特别是负责编码表面抗原“a”决定簇的序列发生改变，表面抗原“a”决定簇是主要抗原决定簇，为各亚型所共有，位于高度保守的表面抗原第124~127位氨基酸的新水区，此区富含半胱氨酸并借位于第124、137、139和147位间的二硫键形成双环结构，从而维持表面抗原的抗原性，所以，此区哪怕仅1个氨基酸发生突变，也会影响表面抗原的抗原性，使其抗原

6、性发生改变，或者表达下调节器，甚至不表达。从而使得常规试剂检测为HBsAg阴性，由此可见，HBsAg检测阴性的血液中，仍可能有一定比例铁HBV感染血液。　　目前，国外普遍检测抗HBc，因HBsAg检测阴性的HBV感染者中，单项抗HBc阳性的病人中比例是最高的，考虑到国内的乙肝病毒感染率远高于国外，因此，尤有必要对HBsAg检测阴性所致的HBV输血感染问题引起重视，并进行必要的研究探讨，从而采取相应的措施，如病毒核酸检测等，以降低经输血传播HBV的可能性。　　四、试剂盒的质检、初检和复检试剂的选用　　现在，国内用于血液筛查的试剂盒，尽管已有批批检，但不同厂家不同批号的试剂盒

7、在用于特定标本检测的时候，结果仍可能有差异，此外，试剂盒从厂家到用户手中，还会出现运输和贮存过程中对试剂盒质量有影响的问题，因此，试剂盒在使用前必须进行质检，质检的重点包括试剂盒有效期、测定下限、抗干扰能力以及对特殊标本的检出能力等方面。目前，血站在血液筛查时，有初检和复检两次检测，分别使用不同厂家的试剂盒进行，如何选择初复检试剂，也是值得注意的一个问题。比如，HCV感染者血循环中存在针对HCV不同蛋白的抗体，而具有针对某种蛋白的抗体是否出现、出现的时间、持续时间长短均有所差异，因此ELOSA测定时所使用的包被抗原必须全面，才