反相高效液相色谱法在医学临床中的应用

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1、反相高效液相色谱法在医学临床中的应用引言反向高效液相色谱法是色谱中的一种特种技术。应用本法研究药物在正常人体内的药动学，具有简便，迅速，准确等特点。RP-HPLC-UV的分析检测方法，该方法不需要特殊的设备，而且分析方法的稳定性好，精密度高，时间段，过程简单，可以作为药物定量分析方法。自从反相高效液相色谱法应用以来，有关此理论和实际应用的文献已经大量出版。目前，反相高效液相色谱法已经为许多实验室的常规手段。理论概要建立反相高效液相色谱法测定人体内某部位药物浓度。化合物坚持扭转高水流动相色谱法柱喝反相高效液相色谱法列高有机流动相

2、洗脱。在反相高效液相色谱法或何物分离的基础上他们的疏水性。肽可以分开运行的有机溶剂的线性渐变。研究运行60╱60梯度chromatographing未知时。60╱60梯度，梯度开始接近100％的水和坡道在60分钟内以60％的有机溶剂。大部分肽﹙长度在10至30个氨基酸残基﹚洗脱时间梯度达到30％的有机。医学上的应用1.用药后的房水进行定量测量：眼内药代动力学实验：双眼滴入眼液，将获取的房水用反相高效液相色谱法进行定量测量。结果滴眼后不同时间测定的房水中的药物浓度不同，实验结果提示局部点眼获得的房水浓度低于对大多数真菌的最低抑菌

3、浓度说明单独点眼效果不好。所以应配合全身用药，改进用药途径增加眼内穿透力，以及增加点眼次数来克服此弊端。因此频繁点眼也是增加眼内穿透性，缩短病程的重要手段。病例病程较长滴眼次数过少可能事原因之一。2.测量人体组织液中药物浓度：本研究采用乙酸乙酯直接提取血浆样品，操作简便，提取后样品中杂质干扰少，各药物的萃取回收率高，均在75%以上，且通过有机溶剂的提取和浓缩，测定的灵敏度进一步提高。由于乙酸乙酯比重较轻，与血浆混合后不易乳化，且液面处于上层，所以实验操作更方便。在进行流动相条件筛选时，考察不同配比的分离效果，发现在甲醇：水﹙6

4、5:35﹚时，各色谱峰及内标间分离效果好，且峰形尖锐，柱效高，完成一次测定只需15min。㏎选择230nm波长是经过分析发现目标成分在230nm紫外吸收系数均比较大，可以提高灵敏度。由于本方法流动相中无缓冲盐和改性试剂，因此测试过程中平衡和冲洗色谱系统的时间比较短，有利于提高测定效果，更合适临床应用。3.药物腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究：测定腹腔注射药物后不同时间家兔房水中的质量浓度，计算其药代动力学参数，研究药代动力学特点。关于样品的处理和流动相选择，以甲醇处理样品和选择甲醇：水：磷酸缓冲液或甲醇：水为流动相的报道较

5、多。也有选用高氯酸处理血样和甲醇：水：冰醋酸为流动相的报道。我们采用高氯酸沉淀放水中的微量蛋白，一甲醇：水：冰醋酸=35:65:0.2为流动相，色谱柱为DiamonsilC18不锈钢柱，在波长为250nm紫外光下对腹腔注射药物量浓度的测定。通过高氯酸空白，防水空白和房水溶解药物标准品对照测定，以及回收率测定为87.60％，日内RSD为4.0％，日间RSD为5.32％，无其他峰干扰。结果表明，本方法具有特异，灵敏，快速等优点，使用于对房水药物质量浓度的测量。4.药物在玻璃体内注射的药代动力学研究：取玻璃体样品，用反相高效液相色谱

6、法测定玻璃体腔内N质量浓度。用DAS软件计算主要的药代动力学参数。增殖性玻璃体视网膜病变的治疗主要是通过手术促使增生性病变的视网膜复位，但仍有10％左右的患者术后发生增殖性玻璃体视网病变。因为玻璃体手术虽然能切除已形成的增生膜，但不能完全取出增生细胞，甚至会刺激细胞分化，增生，又形成增殖性玻璃体视网膜病变。所以，药物防治增殖性玻璃体视网膜病变是非常必要的。近年来多种抗细胞增生药或抗炎药防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究取得了一些进展，主要有抗肿瘤，抗过敏，降血压，酪氨酸激酶抑制剂等，但是目前在临床上仍无理想药物可供使用。5.

7、其他应用：5.1甲锭反应液中甲锭含量：用反相高效液相色谱方法建立了甲锭的分析测定方法，并分离了甲锭及其衍生物。以甲醇：水=40:60为流动相，流量0.12ml／min,在ThermoHypersilODS柱﹙2.1mm100mm,3μm﹚,检测波长276nm的色谱条件下，甲锭及其衍生物得到了很好的分离。在选用的色谱条件下，甲锭在0.5-10μm,检测范围内有良好的线性关系。在0.5mg／ml,2.5mg／ml／和10mg／ml两个浓度的相对标准偏差分别为2.717％和1.818％。本法操作简便，快速，准确，可适用于甲锭化合物的

8、定性与定量研究。5.2测定丙酮酸发酵液中丙酮酸：应用反相C18色谱柱ODS-2HYPERSIL250mm×4.6mm5μm,以0.05mol／lNH4H2PO4﹙用H3PO4调pH2.6﹚为流动相，发酵液经稀硫酸预处理后直接进样分离定量，每一样品的分析过程不超过5min,可及