NY82.15-1988果汁测定方法.pdf

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1、NY82.15—1988中华人民共和国农牧渔业部部标准果汁测定方法β‐胡萝卜素的测定NY82.15—1988本标准等同采用国际果汁联盟IFJU分析法。No.44(1972)—总类胡萝卜素和β‐胡萝卜素的测定。1原理利用甲醇‐石油醚将果汁中的总类胡萝卜素抽提出来,经氧化铝柱层析,使β‐胡萝卜素与其它色素分离,将洗脱液于450nm波长处进行比色测定。2试剂2.1甲醇(京Q/HG10—1506—1976):分析纯。2.2石油醚:(HG3—1003—1976):分析纯,沸程60~90℃。2.3硫酸钠(GB639—1977):分

2、析纯。2.4石英砂:过筛,用浓盐酸浸泡,除去铁质,再以稀氨水浸泡,最后用蒸馏水冲洗至中性,烘干备用。2.5氧化铝(HGB3413—1962):分析纯,用8%水使部分失活。2.6标准β‐胡萝卜素溶液:溶解20mgβ‐胡萝卜素于少量氯仿中,用石油醚(2.2)稀释至50mL,用时吸取2mL再以石油醚稀释至100mL,浓度为8μg/mL。注:用氧化镁代替氧化铝,效果也很好。3仪器3.1分析天平:感量0.0001g。3.2分光光度计。3.3层析柱:φ2㎝,L25㎝的层析柱。3.4分液漏斗:250mL。3.5过滤器。3.6真空浓缩

3、器。3.7容量瓶:50mL、20mL。3.8移液管:5mL、10mL、25mL。4测定程序4.1提取准确称取10g果汁于烧杯中,加入30~40mL甲醇和石油醚溶液(1∶1),搅拌,过滤。转移滤液至分液漏斗中,加入甲醇和石油醚溶液(1∶1)重复提取,直至石油醚相呈无色。4.2洗涤加蒸馏水100mL于分液漏斗中,旋摇使提取液中的甲醇溶于水中,静置澄清,放掉下面含有甲醇的水层。经反复洗涤,直至提取液中的甲醇与石油醚完全分离。加入无水硫酸钠干燥石油醚层,然后过滤到200mL容量瓶中,用石油醚洗涤硫酸钠,洗涤液并入容量瓶中,再用

4、石油醚稀释至刻度。4.3浓缩中华人民共和国农牧渔业部1988-01-27发布1988-08-01实施NY82.15—1988取175mL提取液真空浓缩至5mL左右。为清除痕量残留的甲醇,再取10mL石油醚,真空浓缩至2~3mL。重复两次。4.4柱层析及洗脱层析柱中,氧化铝的填充高度为8㎝。先用8%的水使部分失活。再加入纯石油醚,当石油醚流出至液面刚好填过氧化铝层为止。将浓缩提取液加入层析柱中,使各种色素在柱上逐渐分离,而石油醚淋洗液则由下端流出。当加入约25mL石油醚后,β‐胡萝卜素馏分便到达柱子的下限。此时,可再加入

5、25mL石油醚淋洗,将馏出液收集在25mL量筒中,转移至50mL容量瓶中,并用石油醚洗涤量筒数次,合并洗涤液于容量瓶中,最后用石油醚定容。4.5比色测定标准曲线的绘制:用浓度为8μg/mL的标准胡萝卜素溶液配制成一系列浓度为0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μg/mL的石油醚溶液,用纯石油醚作空白,用1cm比色皿,于450nm波长处测读吸光值。以吸光值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。用同样方法测读提取液的吸光值。从标准曲线中查出其含量。5结果的表示和计算β‐胡萝卜素的含量表示为mg/100mL

6、试液,取两位小数。对浓汁应表示为mg/100g试液,取两位小数。附加说明:本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准主要起草人:张坤英。中华人民共和国农牧渔业部1988-01-27发布1988-08-01实施

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