NY335-1998增产菌生产工艺流程.pdf

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1、NY335一1998前言本标准由农业部科学技术与质量标准司提出并归口。本标准起草单位:中国农业大学.本标准主要起草人:梅汝鸿、徐维敏、蒋慧敏。中华人民共和国农业行业标准NY335一1998增产菌生产工艺流程Productiontechnologicalprocessofyield-increasingbacteria，范围本标准规定r增产菌芽饱杆菌(Bacillussp.)的生产工艺流程、技术要求和操作规程。本标准适用于以芽袍杆菌为菌种，经液体深层发酵法生产增产菌粉剂产品的发酵工艺2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效所有标准

2、都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。HG/T3309-1983农药粉剂细度M9定方法(原HG/T2-896-83)NY334一1998增产菌粉剂3总则增产菌属芽袍杆菌是依据植物微生态学原理研制出的一种微生态制剂增产菌生产工艺流程选用芽抱杆菌为菌种，经液体深层发酵法制成粉剂。主要环节为原菌种活化，菌种扩大培养、种子罐培养~发酵罐培养~添加填充料~压滤、干燥，粉碎，粉剂质量检测~包装~产品检测。4技术要求技术要求见表1e表1步骤项目名称技术指标温度121-125-C实消压力0.11MPa1灭菌要求压力空消压力0.11MPa时间30min温度28^30'C压力0.05

3、MPa月企星th冬2'a卜5RIT通气量1e1(每分钟进出空气体积比)pH值7.0-7.5含菌量>30亿个/93放罐指标芽泡形成量>70%杂菌量G0.3%中华人民共和国农业部1998一06门1批准1999一01一01实施NY335一1998表1(完)步骤项目名称技术指标一含菌龟30。亿个!g{含水豪}一‘5%一—4成品标准细度0.09mm孔径筛杂菌毋成1%5生产工艺流程原菌种活化、菌种扩大培养~发酵罐培养、加填充料、压滤‘千燥一粉碎~成品检验，包装6菌种生产操作规程6.飞仅器设备和试剂无菌室或超净工作台、灭菌锅、试管、克氏瓶、冰箱、温箱、显微镜、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、牛肉膏、蛋白陈和琼脂

4、等6.2培养基制备按如下配方制备培养基:牛肉膏0.30a，蛋白陈I%,氯化钠0.5%，琼脂2%。将琼脂加热溶化后用。1mol/I氢氧化钠或。1mol/t.盐酸调PH道7。一7.5,然后分装克氏瓶或试管，凳于灭菌锅内，在0.”MPa压力下灭菌30min，冷却后制成斜面备用。6.3菌种活化与扩大培养用培养基在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，置放试管斜面内进行划线，然后置28--30'C'温箱内培养24h经检查无杂菌，菌体生长整齐，再置于28-30'C温箱内培养24^-28h，肉眼观察，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，芽饱大小一致的，可放冰箱中存放备用(4C左右为宜)。涂片、染色方法按7.

5、2.83规定进行.7发酵生产操作规程7.1仪器设备和试剂种子罐、发酵罐、水浴锅、显微镜、载玻片、克氏瓶、三角瓶、试管，吸管、血球计数板、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、PH试纸、酒精、品红、孔雀绿等。了.2种子罐培养7.2.1培养基种子罐培养基所用碳原主要有葡萄糖、玉米浆、淀粉、糊精、植物油(兼消泡剂〕;氮原主要有花生饼粉、豆饼粉、鱼粉、无机盐及微量元素一般发酵参考如下配方装料:花生饼粉。5%,鱼粉0.3%，玉米浆。.5%,葡萄糖。.3%，豆油。2%一。3%(或泡敌。.3%)7.2.2空发酵罐灭菌发酵罐在应用前清洗干净，排除污物.并在。.11MPa压力下灭菌30min,了.2.3种子罐装料参考7.

6、2.1的配方比例装料，投料量不得超过罐容积的700o7.2.d发酵罐灭菌装好料后，在。.11MPa压力下灭菌30min，冷却至30C后即可接种。了2.5种子罐接种7.2.5.1悬浮液制备在无菌条件下将每个克氏瓶斜面菌种加100m工无菌水，把菌苔刮下制成饱子悬浮液，含菌量为10亿个菌体/ml，并在soc恒温水锅中处理20n11n‘NY335一19987.2-5.2接种将制好的抱子悬浮液，在无菌条件下接种后，按1%的比例接种于冷却至30'C的种子罐内进行培养7.2.6种子罐培养条件的控制接种后在温度为28^30C,压力。05MPa,通气量1:1(每分钟进出空气体积比)和220r/min搅拌条件

7、下，培养8-10h,7.2.7发酵罐培养过程中的检测接种后4h开始，每隔2h取样一次检测，包括菌体生长状况、含菌量和PH值，达到如下指标，即可移种至发酵罐内发酵培养。。)菌体生长整齐;b)处于对数生长期;。)含菌量2亿个/ml_以上;d)无杂菌污染。7.2.8检测方法7.2.8，取样在无菌条件下.取培养液50^-100ml。于灭菌三角瓶中，检测备用。7.2.8.2PH值的调节用PH试纸(适用范围PH值4--8)进行比色，