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1、脑啡呔与生长抑素在鸡视网膜无长突细胞共存的免疫组织化学研究维普资讯////0>.,.解剖学报第卷第期年月、脑啡肽与生长抑素在鸡视网膜无长突细胞共存的免疫组织化学研究‘李海标林文杰中山医科大学组织学胚胎学莪究宣,广州’美国贝勒医学院生物科技中心中山医科大学客座教授?扣要本文介绍用免疫组织化学的单耘和双标技术研究脑啡肽和生长抑素在鸡视雕膜无长突细胞的定位和共存。单标的实验结果表研,一些免疫反应阳性无长突细施的形态、胞体在内攘层的位置及其突起在内网层的分支式样与某些免疫反应阳性无长襄细胞相谯【,虽然其突起在内网最
2、的第、韭层形戚的丛网不豪免疫反应阳性突起酃样丛寿.在内蹰属的第亚层也束见免疫阳性亮超。震括的实验绪果表明,一些无亡窘细邕显示和两种免痉阳性反应,而另一些无长安细胞舟别只显示或阳性免疫反,应。文中还对视网膜神经多肚间或与经典抖妊遵霞的共存进行了讨论。关■谭脑璋肚生长抑素共存视网膜无长突细胞免疫组织化学过去,视网膜一直被认为是中枢神轻系统的一个特殊部分,在那里没有神经多肽与经典神经遵质,或神经多肤与神经参肽共存乎神经元内”。直到年底,等及和首次同时在脊椎动物视网膜的无长突细胞发现了神经多肤与经典神经递质的共存。
3、稍后,投们在鸡的视网膜无长突细胞中,首次发现了神经多肽与神经多肽的共存.。近年,我们和其他实验室的研究表明,,视蹰膜神经元与中枢神经系统其他部位的神经元一样,可有神经多肤与经典神经递质或神经多肚与神经多肽的共存。比较近年用免痉组织化学方法,研究神经多肤在鸟类视网膜定位的结果表明,免疫反应无长突细胞与免疫反应无长突细胞的形态、大小、胞体在内按层的位置和它们的突起在内网层的分布都报相似’日。这些形春学特征提示这两种神经多肽可能共存于某些无长突细胞内。本文的主要且的是应用免疫组织化学双标技术,在同一视网膜切片上研
4、究这两种神经多肚在鸡视网膜无长突细胞的共存。材料和方法用正常~周龄莱亨鸡只。乙醚轻度麻醉后断头,取出眼球,从角巩缎处切开眼球,去除晶状俸和玻璃体后,把整个眼球置于多聚甲醛./磷酸缓冲液.,冰箱内℃固定过夜,再用冲洗次,然后放人含蔗糖的溶液中℃过夜。矢状切的半边眼球于包埋荆中包埋,低温冰?切片机切片,厚~,切片贴于预先涂好明胶的载玻片上。经.和正常羊血清先后处理分钟。用于单标免疫组织化学染色者.分别在:兔抗脑啡肽血清一由美国国宗自然科学基盘费助项目维普资讯////.解剖学报卷教授意赠或:兔抗生长抑素血清,美国
5、加州大学洛杉基大学教授惠赠中预孵过夜,这两种血清的制备和特性详见有关文献,”。漂洗,然后用免疫荧光法和击作免疫组织化学染色。免疫荧光珐用羊抗兔免疫球蛋白结合异硫氰酸荧光素:室温中孵育小时。法则依次于:的生物素结合的羊抗兔血清抗血清均用含盐的磷酸缓冲溶液,,.稀释;:的?混合液中室温孵育备小时。再用氯基联苯胺及过氧化氢作呈色反应。以上各步骤之间均用冲洗次,每次~分钟,用:的甘油:溶液封片。用于免疫组织化学双标染色者,切片在:产白小鼠的抗脑啡肚单克隆抗体由美国林文杰教授实验制备和提供,此抗体的特性详见有关文献”
6、中孵育过夜℃,漂洗后,除用生物素结合的羊抗小鼠血清代替羊抗兔血清外,用与上述相同的免疫组织化学处理,过氧化氧呈色后,冲洗次,每次分钟,然后用:抗生长抑素血清℃孵育过夜,洗次后,再用:羊抗兔免疫球蛋白结合异硫氰酸荧光素,皇温中孵育小时,冲洗次,用:的甘油:封片。相差和荧光显微镜下观察及摄片。对照实验.分别用正常兔血清代替第一瑗抗或抗血清。.用第一缀抗或抗抗血清,分别甩/的壶抗原置于℃吸收过夜,取其上清液孵育标本,其他步骤同上,均来见阳性免疫反应的细胞和纤维。.切片经.抗体孵育后,用法处理,过氧忧氢呈色后,不经
7、抗生长抑素血清孵育,只用羊抗兔免疫球蛋白结合的孵育。结果只有呈阳性反应,宋见呈觉疫荧光反应的胞体和突起,证明羊抗兔免疫球蛋白结台血清不麓与抗抗体复合物结台。.抗血清和.单克隆抗体,分射颓先用/的和/的抗原置于℃冰箱吸收过夜,取其上清液孵育标本,其他步骤同上,结果分别显示有和免蠖阳性的胞体和突起,表明上述抗体或抗血清与这两种抗原无交叉反应。、结果免疫荧光组织化学和免疫组织化学的单标记实验表明,在鸡视网膜,免疫反应阳性无长突细胞的胞体呈卵旧形,直径约~,胞体位于内棱层最内缘的第或第排细胞内,胞律发出突起伸人内网
8、层,在其第亚层分支交织成稀疏的丛网,然后再发出串珠状突起,在内网层的第、亚层反复分支,形成致密的丛网,偶见突起分支伸到内网层的第亚层图右。鸡视网膜免疫反应晃长突细胞的形袄、大小、胞体在内棱层的位置和突起在内网层的分布都与免疫反应无长宾细胞相似,但其突起在内网层的第、亚层形成的丛网不如那样致密。未见其窭起分支伸人内网层的第亚层图左。在同一视网膜切片上,用免疫组织化学和免疫荧光法的双标实验表明,无论在视网膜中央区和周
