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时间:2018-07-22
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1、酵母扩大培养过程关键控制点金星集团信阳啤酒有限公司黄华龙465100啤酒工厂从单细胞分离得到一个酵母细胞,经过鉴定确认、生产试验,得到优良菌株,然后经过若干次扩大培养,最后制备成107~108个细胞/ml后供发酵用,酵母扩大培养关键在于:第一,选择优良的单一细胞出芽菌株;第二,在整个扩大培养中保证酵母菌种的强壮、无污染。近代由于发酵规模越来越大,对接种酵母要求越来越严。各工厂扩大培养方式和顺序大致相同,而扩陪的结果得到种酵母的纯度、强壮情况、污染情况却差异很大,其原因在于是否有一个科学、无菌的扩培技
2、术管理。一、出芽菌株的选择作为扩大培养的出芽菌株,,无论是实验室保藏菌株还是生产现场(主酵或酵母泥)分离得到的菌株。一般均需进行单细胞分离,并通过一系列生理特性和生产性能测定,包括酿酒口味鉴评后,确认是工厂生产需要的优良纯种后才允许投入生产扩大培养。此单细胞分离和菌株鉴定,需要在有丰富微生物理论和实践经验的技术人员指导下进行。二、扩陪过程的无菌操作扩大培养应严格建立在纯种的基础上,扩大培养过程的无菌技术是扩陪成败的关键。它包括:培养器皿、设备的无菌,移种操作的无菌,培养过程中通风调节温度的无菌。在汉
3、生罐以后从麦汁进罐至移种结束,必须保证汉生罐处于正压状态,这是杜绝吸入有菌空气的先决条件。一、优良的培养基麦汁是啤酒厂最方便的酵母培养基,但绝对不是“凡可以用来酿造啤酒的麦汁均是优良的培养基”。许多工厂,常常从大生产麦汁中分割作为任何一级扩陪培养基,由于麦汁组成太差,会造成扩大培养失败。无论是哪级扩陪,培养基均需要有特殊要求的麦芽汁。实验室(从试管至大锥形瓶)培养用麦汁,一般应有实验室自己制备,可按以下方式制备成10°P全麦芽麦汁用于试管活化及菌种保藏。1.麦汁制备:1)称取优级麦芽约200g,除去
4、铁屑、石粒等坚硬杂质,采用EBC粉碎。2)调EBC粉碎机的磨间距,使细粉颗粒直径为0.2㎜。3)料水比例:1:3~3.54)称取细粉适量(准确至0.1g),于已知重量的糖化杯(500~600ml专用金属杯中),加入46℃水200ml,在不断搅拌下于45℃水浴中保温30min。5)把温度数显表调至70℃,设定。使醪液以1℃/min的速度升温,在25min内升至70℃,此时于杯内加入70℃水100ml(加水时注意冲洗杯壁和搅拌棒)。6)醪液在70℃下保温1hr,在保温10min时开始碘检,用玻璃棒取一滴
5、麦汁,置于白瓷滴板上,冷却后加一滴碘溶液,混匀。观察碘液颜色变化,每隔5min重复一次试验,直至碘液呈黄色。1)保温结束后,在10~15min内用冰水迅速冷却至室温。2)用水冲洗搅拌器,擦干糖化杯外壁,放置托盘天平上,加水使其内容物准确称量为450.0g3)取干燥玻璃漏斗,内放入折叠好的中速滤纸,置于铁架台的固定铁环内,漏斗下用塑料杯连接。4)将最初收集的约100ml滤液返回重滤,收集滤液于平底烧瓶内。5)把滤液置于甘油浴内煮沸40min后,或用电炉煮沸也可,用双层滤纸过滤至干燥杯中。滤液用冰水冷却
6、至15℃,取一洁净、干燥、恒重的比重瓶,用滤好的麦汁入20±1℃的高精度恒温水浴中,待内容物温度达20℃时,用滤纸吸取溢出支管的水,盖上小帽,擦干瓶壁,立即在分析天平上称量(准确至0.0001g)6)根据公式计算滤液的比重。(按常规麦汁检测方法操作)7)然后从附录A中查出该比重所对应值,该值即为麦汁的浓度。要求浓度为11±0.2°P,如达不到,则重做。1.麦汁培养基的制备1)澄清(1)按0.5—1L使用一个鸡蛋清的比例,取若干个鸡蛋,收集蛋清于一洁净的烧杯中用搅棒把蛋清打成泡沫儿。(2)将麦汁加热至
7、45±2℃,加入打成泡沫的蛋清,在不断搅拌下保温30min然后升温煮沸30min。(3)煮沸后的麦汁用水浴冷却至80—90℃,用双层中速滤纸过滤。1)调糖度:将麦汁用蒸馏水调糖度至11±0.2°P。2)用1N的磷酸调PH5.4~5.8,(检测方法同糖化检测醪液PH),即制成了麦汁液体培养基。3)分装:准备18×180的试管10支,每只试管各加10ml液体培养基。4)灭菌:将分装好的培养基放入高压蒸汽锅灭均,0.05Mpa40min。放入无菌室备用。1.蛋清的制备取10个新鲜鸡蛋,收集蛋清,把蛋清打成
8、泡沫儿,备用。2.液体培养基的制备取约10升大生产用的糖化麦汁,用滤布过滤后,加热至40℃,加入事先已准备好的蛋清煮至沸腾后,开始计时,再煮沸20分钟,加适量蒸馏水补充到麦汁浓度要控制在10℃~11℃之间,再煮沸至沸腾后,放凉、过滤。用1N的磷酸调pH5.4~5.8,备用。3.液体培养基的分装⑴在20×200的试管中,加入10毫升液体培养基⑵在250毫升锥形瓶中,加入150毫升液体培养基⑶在3000毫升锥形瓶中,加入1500毫升液体培养基⑷分装完毕后,试管和锥形瓶分别
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