血清总胆固醇(tc)测定操作规程

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1、血清总胆固醇(TC)测定操作规程A1．2原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下：胆固醇酯+H2OCEH胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+02CHOD△4-胆甾烯酮十H2022H202+4－氨基安替比林+酚POD昆亚胺+4H2OA1．3标本采集与处理对于血脂分析，特别需要强调“分析

2、前”各个环节的质量管理。A1．3．1受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性

3、观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。A1．3．2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立5min可使血脂浓度提高5％，15min提高16％，故在采血前至少应***5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％～15％。A1.3．3抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。如用血浆，多主张用EDTANa2(1mg／mL)抗凝。抗凝血浆中的总胆固

4、醇和甘油三酯水平比血清中约低3％，EDTA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。A1．3．4标本处理：血标本应尽快送实验室。室温下放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖保存。在室温中放置不超过3h，4C保存可稳定4天。置-70'C可长期保存，但不可反复冻融。A1．4试剂A1．4.1酶试剂：本科使用XX公司XX产品号试剂盒，为干粉试剂。临用前用水复溶即可使用。每瓶干粉用水XXml复溶。复溶后试剂内各主要成分如下：磷酸盐缓冲液pH7.70．4mol/L假单胞菌胆固醇酯水解酶≥800U/L奴卡氏菌胆固醇氧化酶≥400U/L辣根

5、过氧化物酶≥1000U/L胆酸钠3mmol/L4—氨基安替比林0.5mmol/L酚3.5mmol/L聚氧乙烯表面活性剂3g/LA1.4.2总胆固醇校准血清：也由XX公司提供，产品号为XX。A1.4.3试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于4℃保存，可稳定至有效期。复溶的试剂在2℃～8℃可稳定7天，15℃－25℃可稳定3天。如在稳定期内试剂出现明显的粉红色，弃去不用oA1.5仪器，XX型号光电比色计，具500nm～520nm滤光片。A1.6操作标本为及时分离的空腹血清，以及肝素或EDTA抗凝血浆。本法为终点法。测定时标本管与标准管分别加入标本与标准血清各10uL，酶

6、试剂1．00mL，混匀后在37℃放置5min，或20℃～25℃放置10min后用比色计比色，以试剂空白调零，波长500nm或520nm，颜色至少稳定60min。A.1．7计算A测定C=×C0-------------------------(A1)A标准式中：C——测定血清总胆固醇浓度，mmol／L；A测定——标本管吸光度；A标准——标准管吸光度；Co——校准血清中总胆固醇浓度，mmol／L；A，1．8操作性能A1．8．1精密度：批内CV<1.5％，批间CV<2.5％；A1．8．2准确度：以参考方法(ALBK法)定值的血清为校准品时，本法测定结果与ALBK法基本一

7、致。A1．8．3灵敏度：以酚为显色剂，总胆固醇为5.2mmol／L时的显色吸光度A500nm约0.30—0.35。A1．8．4可报告范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上限为13mmol／L。A1．8．5特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。一般人血清中非胆固醇甾醇约占总胆固醇的1％，在常规测定时这种影响可以不计。A1．8．6干扰：血红蛋白高于2g/L时会引起正干扰；胆红素>170umol/L时有明显负干扰。抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高于治疗水平时也使结果偏低。高甘油三酯血症(血清混浊)在本法中(血清与试剂量1：100时)一般无明显影响

8、。注1本法