血清胆固醇的测定

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1、血清胆固醇的测定余留海2013.11.26血清胆固醇的测定（氧化酶法）AssaysforSerumCholesterol一、原理二、测定方法三、参考值四、临床意义五、方法学评价六、注意事项七、小结一、原理血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物。胆固醇酯+H2O胆固醇+脂肪酸（CE胆固醇酯酶）

2、胆固醇+O24-胆甾+3-烯酮+H2O2（COD：胆固醇氧化酶）H2O2+4-AAP+酚H2O+醌亚胺（红色醌类化合物）（4-AAP：4-氨基氨替比林）（POD：过氧化物酶）红色醌类化合物生成量与样品中胆固醇含量成正比，与经过同样处理的胆固醇校准液进行比较，即可计算出样品中胆固醇的含量。二、测定方法1、试剂R1：胆固醇酯酶（CE）≥0.4KU/L胆固醇氧化酶（COD）≥0.2KU/L过氧化物酶（POD）≥5.0KU/L4-氨基安替比林（4-APP）0.5mmol/LR2:酚20.0mmol/L胆酸钠2.0mmol/L二、测定方法2.加样

3、各管充分混匀置37水浴10分钟后，室温冷却测定试剂蒸样品管(U)标准管(S)空白管(B)血清（ml）0.02——标准液（ml）—0.02—蒸馏水（ml）——0.02工作试剂（ml）2.002.002.003.分光光度计测定方法：波长505nm，以空白管调零，测定标准管和样品管吸光度值，按公式计算测定结果。计算公式：Glu含量（mmol/L）=×Cs其中：Cs=5.22mmol/L三、参考值：正常：﹤5.17mmol/L轻度增高：5.17～6.47mmol/L四、临床意义：1.血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合征、肝细胞性黄疸、阻塞性

4、黄疸及重症糖尿病等。血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。血清总胆固醇水平分为三级：合适范围5.72mmol/L(220mg/dl)。边缘升高5.23-5.69mmol/L(201-219mg/dl)；过高值>5.72mmol/L(220mg/dl)。血清总胆固醇水平增高是导致冠心病的独立

5、危险因素。血清总胆固醇越高，发生动脉粥样硬化的风险越大，时间也越早。血清总胆固醇每降低1%，发生冠心病的危险性可减少2%。但另一方面，血清总胆固醇降到多低合适？目前认为，将血清总胆固醇保持在2.1-5.2mmol/L(90-200mg/dl)范围内较为合适。对已有动脉粥样硬化或冠心病者，应将胆固醇降至180mg/dl以下。2.血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。甲亢患者在发病期间其血清胆固醇水平往往明显低于正常值，或者属于临界值范围；当通过一段时间的有效治疗后，血清胆固醇又会逐渐回复至正常水平。其

6、降低的机理是，甲亢导致甲状腺激素大量分泌，而甲状腺激素对脂肪的合成与分解有很强的促进作用，但是分解更明显。由此可知，当机体发生甲亢时，体内的胆固醇合成与分解排泄同时都有所增加，但分解排泄比合成更明显，而同时，甲状腺激素还通过增强腺苷环化酶－cAMP系统的影响和致敏组织对儿茶酚胺、生长素等脂肪动员激素的作用而促进脂肪溶解。所以导致血清中的胆固醇会有所降低。五、方法学评价1.线性范围：0.05～12.9mmol/L，r≥0.9902.精密度：CV≤3.0%，批间差≤5.0%，3.准确度：相对偏差±10%4.试剂空白吸光度≤0.150（波长5

7、05nm，光径10mm）5.左旋多巴、尿酸、vitc、胆红素、谷胱甘肽等达一定浓度时可竞争过氧化氢使结果偏低6.半胱氨酸（促G生成）使结果偏高。六、注意事项1.样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTANa或K抗凝）；2.制备血清时防止红细胞溶血；3.样品应在低温条件下运输保存。4.试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。5.避免误食和皮肤、粘膜接触。小结谢谢！